NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒,NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C，还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。

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产品名称：NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒
产品规格：50管/48样
保存：2-8℃
测试方法：可见分光光度法

测定意义：
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员，催化氧化型P450还原再生。

测定原理：
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C，还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。

自备仪器和用品：
普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒试剂组成和配置：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存。临用前根据用量每瓶加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1管，-20℃保存。临用前配制，加1.04 mL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
试剂四：粉剂×1管，4℃保存。临用前配制，加1100 μL蒸馏水充分溶解，4℃保存。

粗酶液提取：
1、除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1 mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1。
4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。△A测定管=A4-A3。
注意：空白管只需做一次。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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