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价格：电议
所在地：江苏 南京市
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更新时间：2024-05-23
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公司地址：南京市江北新区智能制造产业园（智合园）科创大道9号A2栋209-20室
杨(先生)
运输和保存
1．1 mL冻存管包装干冰运输，收货后-80℃冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏。若发现干冰已经挥发干净、冻存管盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2．T25瓶培养的细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
培养瓶细胞接收后的处理
1．收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2培养箱中静置3-4 h，以稳定细胞状态。若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2．请在显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照，10倍和20倍各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后依据。
3．细胞收货脱落：293T细胞贴壁能力弱，收货如有大面积脱落的细胞团为正常现象。若细胞在快递运输途中因振动脱落，先将培养瓶放入37℃，5%CO2培养箱中静置3-6 h，让少数脱落的细胞可再附着生长。若仍有脱落聚集的细胞，则 (1) 收集所有细胞悬液，1000 rpm离心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至离心管中，重悬沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向离心管内加入5 mL完全培养基终止消化；(4) 1000 rpm，离心5 min，丢弃上清，用5 mL完全培养基（补加1-5% FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；(5) 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4．收货细胞的培养和传代：在显微镜下观察细胞生长状态，若细胞生长密度在60%以下，可去除培养瓶中的灌液培养基，加入新配制的完全培养基，置于培养箱中继续培养。若细胞生长密度达80%-90%以上，可以对细胞进行传代处理。
5．运输用的培养基（灌液培养）不能再用来培养细胞，请换用合适的新鲜培养基来培养细胞。
冻存细胞接收后的处理
收货后-80℃冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏。
细胞复苏：将含有1 mL细胞悬液的冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻，回温后喷以75 %酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。将冻存管中细胞加入到含4-6 mL完全培养基的离心管中混合均匀。1000 rpm离心3-5 min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入培养瓶/培养皿中，培养箱中孵育。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
293T培养注意事项
1．293T贴壁能力较弱，加液、换液、洗涤时，须动作轻柔，避免用液体直冲细胞，会造成细胞脱落。细胞生长不能过密，过密细胞容易脱落，脱落下来的细胞可以通过离心收集，使用胰酶消化后继续培养。
2．293T细胞状态直接影响病毒包装效率。当细胞传代次数过多、细胞增殖速度减缓、细胞贴壁能力非常弱（轻柔换液也能导致细胞半数脱落）时，说明细胞状态不好，会大幅降低病毒包装效率。
3．使用高糖DMEM培养293T，低糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量低的培养基可能影响293T细胞的生长状态。
4．如果发生293T细胞不贴壁，漂浮在培养基中的现象，请确认所使用的DMEM中碳酸氢钠浓度及培养箱中CO2浓度。并参考以下培养体系：
① DMEM由1.5 g/L碳酸氢钠配制而成，使用5% CO2培养箱。
② DMEM由3.7 g/L碳酸氢钠配制而成，使用10% CO2培养箱。
当使用碳酸氢钠含量高的培养基时，必须将这些细胞在10% CO2中孵育，以便正确缓冲培养基。当培养基没有适当缓冲时，293T细胞虽然可以存活，但将无法粘附并保持漂浮在培养基中。
5．培养时可酌情使用预铺0.2%明胶的培养瓶/培养皿，若细胞状态好，可省略此步骤。
6．本细胞仅用于科学研究，不得用于临床治疗。
7．请注意无菌操作，避免污染。
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