采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。

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细菌测试瓶//铁细菌/腐生菌/硫酸盐还原菌/大肠菌群/石油烃降解菌

方法原理：

        采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。

操作步骤：

        ① 将同一品种测试瓶排成一组，依次编上序号（按照估计的细菌量确定测试瓶个数，建议参考数值为：X×100的细菌量用３个测试瓶、X×101的细菌量用４个测试瓶、X×102的细菌量用５个测试瓶、X×103的细菌量用６个测试瓶）。

    做二个平行样重复试验时应排为二组；做三个平行样重复试验时应排为三组。

       ② 用无菌注射器取1ml代表性水样（采样方法依据GB/T12997-1991、GB/T12998-1991、GB/T14581-1993的规定进行）注入1号瓶内稀释，充分振摇，待用（平行样亦按此操作，下同）； ③ 用另一支无菌注射器从1号瓶内抽取1 ml经充分振摇后的水样注入2号瓶内稀释，充分振摇，待用；

       ④ 再用一支无菌注射器从2号瓶中内抽取1ml经充分振摇后的水样注入3号瓶内稀释，充分振摇，待用；

       ⑤ 依次类推稀释直到*一瓶为止，待用。

       ⑥ 将上述有稀释过的测试瓶放入恒温培养箱中培养，按表１进行细菌生长的鉴别。

 

细菌测试瓶//铁细菌/腐生菌/硫酸盐还原菌/大肠菌群/石油烃降解菌

表１  细 菌 生 长 的 鉴 别 方 法

细菌瓶品种		规格型号	培养温度	培养  时间	阳性反应特征
细菌总数测试瓶		KBC—BT	37±2℃	24±2h	瓶中液体由红变黄、或液体混浊、或液体表面出现菌膜、或液体底部出现沉淀。
大肠菌群测试瓶	总大肠菌群	KBC—TCB	37±2℃	24±2h	瓶中液体由紫红变黄
	粪大肠菌群	KBC—TCB	44±2℃
腐生菌测试瓶		KBC—TGB	现场采样温度±3℃	24±2h	瓶中液体由红变黄
铁细菌测试瓶		KBC—FEB		7d	瓶中液体棕色褪去，生成棕色或黑色沉淀
硫酸盐还原菌测试瓶		KBC—SRB		7d	瓶中无色液体变黑或生成黑色沉淀
石油烃降解菌测试瓶		KBC—HDB	29±2℃	5d	瓶中液体由紫红变黄

细菌量计量：

１．在一定温度下培养一定时间后，按瓶号列出稀释梯度，并根据细菌瓶阳性反应的个数，确定生长指标和级数（参见附录及示例）．

２．根据生长指标查表２或表３，确定细菌量基数并乘以级数，即为细菌量总数。

        细菌量总数＝细菌量基数×级数

二组平行样重复试验查表２

  三组平行样重复试验查表３

3、细菌量总数结果报告示例见表４

注意事项

细菌测试瓶//铁细菌/腐生菌/硫酸盐还原菌/大肠菌群/石油烃降解菌

1、测试瓶中若有白色沉淀为过量营养成份，属正常现象，不影响测试。

2、低温条件（约4℃）下，测试瓶储存有效期为一年。

3、测试瓶每一级稀释时，一定要用力振摇1~2分钟，以保证测试结果的准确性。

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