特别提示:包括Bradford蛋白定量试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Bradford蛋白定量试剂盒
产品货号:HR0332
产品规格:250T|1000T
Bradford法(考马斯亮蓝法),是目前灵敏度zuì高的蛋白质测定法之一。当Bradford染色液(考马斯亮蓝G250)和蛋白在酸性条件下结合时,溶液颜色由棕黑色转为蓝色,zuì大吸光值波长由456nm 转至595nm,吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速,稳定和高灵敏度。
Bradford染色液为2倍浓缩母液,便于储存。
储存条件:染色液2-8℃保存。蛋白标准-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ● 水
● 涡旋振荡器 ●分光光度计或酶标仪
使用注意事项:
● Bradford 法对于去污剂敏感的,受高浓度去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用我公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
●染色液使用前请混匀。
● 将G250染色液放置到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
● 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对的蛋白浓度。
● 反应在5分钟后显色充分,但在10分钟后可能开始出现沉淀,故建议在加入染色液后5-10分钟内完成检测,误差较小。
● zuì好使用塑料比色皿,如使用玻璃比色皿或石英比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
使用方法:
A、96孔酶标板测定:
1.蛋白标准工作液配制:根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5倍稀释,配成1mg/ml的工作液。
2.标准曲线绘制。
3.振荡混匀后,室温放置5-10分钟。
4.用酶标仪测定A595,以不含BSA的光吸收值为空白对照。
5.以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
6.样品测定:将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度,取10μl 样品,加入100μl 2×Bradford染色液和90μl的去离子水,混匀后放置5-10分钟,然后以0 号孔为对照,测定样品吸收值A595。
7.根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8.计算蛋白浓度:以查得的蛋白含量除以样品体积10μl,再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
B、比色皿测定
按照比色皿规格,与以上方法相同,适当按比例增加各溶液体积即可。
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货号
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