日本同仁-CK04 CCK-8

公司主要经营：ELISA试剂盒，生化试剂，实验耗材，细胞，血清，培养基，抗体等！代理经销： Sigma、Amresco、invitrogen、Gibco、Hyclone、BD、Roche、GE、Merck、OXOID试剂血清及培养基；NUNC、corning、Axygen耗材；Abcam、santa cruz、CST、R&D抗体，细胞因子等产品；

上海恒渡生物科技有限公司，是一家专注于生命科学和生物技术领域的高科技企业，经营产品主要包括常规生化试剂、分子生物学试剂、免疫组化坑体及细胞因子、细胞培养基、科研仪器及实验室常规耗材等生物技术服务。
公司一方面注意跟踪世界范围分子生物学、细胞生物学等生物学科的发展前沿，努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员；另一方面也非常重视自主产品研究和开发，推出了一系列具有竞争力的产品和服务。公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。 公司在重视产品质量的同时，也建立了一套集技术支持、物流、售后服务等多个部门的全方位的服务体系，努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户。

公司主营业务：
试剂盒：免疫组化试剂盒、ELISA试剂盒、分子生物学试剂盒。
细胞：原装进口细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞。
耗材：细胞培养耗材、普通实验耗材。
抗体：免疫组化、免疫荧光、流式细胞检测、免疫细胞化学。
生化试剂：原装进口生化试剂、进口分装生化试剂、国产生化试剂。

代理经销：
Sigma、Amresco、Invitrogen、Gibco、Hyclone、Roche、Merck
Nunc、Corning、Axygen、abcam、santa cruz、细胞因子等产品；为广大客户带来快捷和方便！

在科学技术飞速发展的今天，恒渡生物紧跟时代步伐，以优良的品质，合理的价格
全心的付出和不断创新的精神为拼搏在科研一线的伟大工作者们提供全方位高品质的服务！

Cell Counting Kit-8

目录号	产品名称	规格	包装
CA1210-100	Cell Counting Kit-8	100 T	1ml
CA1210-500	Cell Counting Kit-8	500 T	5ml
CA1210-1000	Cell Counting Kit-8	1000 T	10ml
CA1210-3000	Cell Counting Kit-8	3000 T	30ml

保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
产品简介： Cell Counting Kit-8 简称CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验
使用说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）
二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO₂的条件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37 ℃，5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
6、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：.
细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0加药)－A(空白)]×100
A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的zui小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。
④如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度zui高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
CCK-8法与其它检测方法之间的比较：

细胞计数方法	MTT法	XTT 法	WST-1 法	CCK-8法
形成的formazan 的水溶性	差	好	好	好
产品性状	粉末	2 瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	现配现用	无需预制	无需预制
检测灵敏度	高	很高	很高	高
检测时间	较长	较短	较短	短
检测波长	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
细胞毒性	高，细胞形态完全消失	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变
试剂稳定性	一般	较差	一般	很好
大批量样品检测	可以	非常适合	非常适合	非常适合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

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