48T 猪繁殖与呼吸综合征美洲通检病毒PCR检测试剂盒

本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ，结合Taqman技术，对特异核酸进行定性或定量检测。

北京大有泰莱生物技术有限公司成立于2014年10月，是注册在中关村科技园区海淀创业园的高科技企业。公司主要从事食品安全检测技术和动物疫病诊断技术的开发和产品研制生产及销售，拥有自主知识产权的原料制作工艺和产品生产工艺。主要技术平台为基于细胞技术的酶联免疫技术和分子生物学PCR检测技术平台。即通过细胞培养获得产品研制和生产所需原材料，开发出各种酶联免疫检测试剂盒，和通过基因合成获得引物和探针，进而开发出各种PCR检测试剂。其他相关技术为光机电一体化、移动互联网技术、云存储及物联网技术等。主要产品为食品安全残留（抗生素、激素、违禁添加物等）检测试剂盒和目前农业部重点监控的动物疫病检测试剂盒，前者主要用酶联免疫技术，后者主要用酶联免疫技术和PCR技术，主要面对客户为经济动物养殖企业、屠宰企业、政府食品安全及动物疫病监管部门，市场区域覆盖全国各省市县，将来计划将产品辐射到中东和东南亚地区。     北京大有泰莱生物技术有限公司传承业内诊断试剂研发生产的经验，借鉴和学习国际先进技术，不仅在多个技术领域如：酶联免疫技术、PCR技术、免疫亲和层析、免疫磁珠、数字PCR技术、二代测序技术等均有较强的技术储备，而且还相应开发出了一系列的具有国际竞争力的检测诊断产品。公司引进国外先进的产品考评体系和生产环节质量控制体系，保障了诊断试剂的批量供应和高标准的品质。目前公司已成功开发产品20余种，多个产品技术指标属业内领先。公司和国内外多个国家和地方科研单位和实验室广泛开展合作，团队成员专业覆盖面广，技术实力强。除了传统的兽医学、微生物学、药物化学、免疫学、分子生物学、光机电等学科外，公司创始团队还融合了其他多个学科专业，如互联网、移动信息技术、云存储、大数据等IT专业技术以及3D打印、纳米材料等其他材料及成型技术。所开发产品受到国内外用户的一致好评。     公司从创办伊始就确立了以自主创新为基础、以市场为导向、以客户为中心、以员工为根本的管理思想。公司集产品研发、生产、销售、技术培训于一体，通过团队协作与相互信任，实现高效运转和市场多赢。公司拥有优秀的人才队伍、先进的仪器设备、规范化的生产和管理，为一流的产品提供了有力保障。公司将乘政策东风而上，紧密结合市场的讯息，在广大用户和合作伙伴的支持下，我们必将倍加努力，为百姓食品安全做出更好的贡献。

规格：50头份

介绍： 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome ,PRRS）俗称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征引起的一种猪高度易感的传染病。母猪以发情滞后，坐胎率低，怀孕后期流产、死胎和弱胎为特征；乳猪和断乳仔猪以严重呼吸道疾病和高死亡为特征。美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（NA-PRRSV）是我国的主要流行毒株。卫生组织（OIE）将其列为必须通报疾病。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为二类动物疫病。

用途：该试剂盒用于对 NA-PRRSV进行检测，有助于NA-PRRSV的实验室诊断、监测和流行病调查。

原理：本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ，结合Taqman技术，对特异核酸进行定性或定量检测。

试剂盒的组成

试剂名称	数量
NA-PRRS反应液	550μL×1管
NA-PRRS酶	40μL×1管
NA-PRRS引物探针	100μL×1管
无核酸水	1000μL×1管
NA-PRRS阴性对照	1000μL×1管
NA-PRRS阳性对照	150μL×1管

保存期及贮藏条件：本产品-20℃避光可保存12个月。

样品收集，操作和储存

1. 选择发病早期，无菌采样并立即送往实验室进行病毒检测。

2. 样品短期可在4℃冷藏保存，较长时间保存应在-20℃或者-70℃，并且避免反复冻融。

检测步骤

1.核酸提取

样品进行适当处理后，可采用本公司的核酸提取试剂盒，该试剂盒可用于对样本中病毒RNA的提取，请按照提取试剂盒说明书进行操作。也可选择其他合适的商品化产品。

2.扩增试剂的准备

将样品数+1份阴性对照+1份阳性对照设为N，计算试剂所需量，反应体系配制见下表

试剂名称	N份用量（20μL 体系）
NA-PRRS反应液	10μL×（N+1）
NA-PRRS酶	0.5μL×（N+1）
NA-PRRS引物探针	1.8μL×（N+1）
无核酸水	5.7μL×（N+1）

将各试剂按照表中用量加入无菌离心管中，充分混匀，短暂离心后在PCR反应管中分别加入18μL混合液。

 

3.加样

将制备好的样本，阴性对照，阳性对照各取2μL分别加入对应反应管中，加完后盖紧PCR反应管盖，置于PCR仪上。

4.荧光PCR扩增与信号收集

循环数	温度（℃）	时间	数据收集位点
1	45	15min	-
1	95	2min	-
40	95	15s	-
	60	1min	数据收集

 

 

 

 

 

 

注：报告基团选FAM,淬灭基团选NONE。

结果成立原则

阳性对照：CT值＜30并有明显的扩增曲线。

阴性对照：无CT值或者CT值>37，线性为直线或者轻微斜线，无明显扩增曲线。

以上要求需同时满足，否则本次实验无效，需要重新进行。

结果判定

CT值	样本检测结果
<30并有明显的扩增曲线	阳性，样本中检测出NA-PRRSV
30-37	可疑，需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性，否则为阴性。
>37并无扩增曲线	阴性，样本中未检测出NA-PRRSV

 

注意事项

1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制，整个实验过程严格控制污染。

2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。

3.使用不含荧光物质的一次性手套，一次性离心管。

4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度，本试剂盒应在5次内用完.

5．-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化，液体融化后需彻底混匀，2000 rpm离心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。

6．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。

7．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。

8.PCR反应管避免气泡存在，管盖需盖紧。

9.不同批次的试剂盒勿混用。

 

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