ELISA试剂盒中正确的洗涤方法
发布时间：2014-07-28浏览次数：794返回列表
ELISA试剂盒中正确的洗涤方法
本文就这一原因作一简要分析，以便可以通过以上措施把非特异显色降至低限度，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。在是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视.无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。
通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。每种试剂都有其佳反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。
温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确，使用双波长,一个检测波长，一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰.此外，在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。
尽管目前上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘）.但由于受方法学及技术条件的限制，在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至低限底，从而提高检测的特异性,并得到更准确、
本文就这一原因作一简要分析，以便可以通过以上措施把非特异显色降至低限度，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。在是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视.无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。
通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。每种试剂都有其佳反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。
温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确，使用双波长,一个检测波长，一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰.此外，在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。
尽管目前上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘）.但由于受方法学及技术条件的限制，在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至低限底，从而提高检测的特异性,并得到更准确、
可靠的实验结果. 1.1 固相载体的选择。ELISA试剂盒中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种，以微量滴定板为常见[1].它具有良好的吸附性能，孔底透明度高,空白值低,各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA试剂盒板由于原料的不同和制作工艺的差别，各产品的质量差异很大.因此,在选择试剂盒同时要对其使用的微孔板型号进行认证,评估。
1.2包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接ELISA试剂盒中，试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制，包被用抗原或抗体的纯度不可能达到,所以有些非特异性显色不可避免，只能尽可能提高纯度,提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。
1.3包被抗体的效价.具有高亲和力和高特异性的包被抗体，是决定试剂特异性的重要方面。
1.4 封闭。是ELISA试剂盒中重要的一步，目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙[2]，减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。
1.2包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接ELISA试剂盒中，试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制，包被用抗原或抗体的纯度不可能达到,所以有些非特异性显色不可避免，只能尽可能提高纯度,提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。
1.3包被抗体的效价.具有高亲和力和高特异性的包被抗体，是决定试剂特异性的重要方面。
1.4 封闭。是ELISA试剂盒中重要的一步，目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙[2]，减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。
