1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

Bcl-xL蛋白抗体 Anti-Bcl-xL 0.1ml

p53正向细胞凋亡调控因子抗体 Anti-BBC3/PUMA 0.1ml

抗磷酸化Bcl-xL(pSer62)蛋白抗体 Anti-phospho-Bcl-xL 0.1ml

丁酰胆碱脂酶抗体(N端) Anti-BCHENT 0.1ml

抗丁酰胆碱脂酶单克隆抗体 Anti-BCHE 0.1ml

丁酰胆碱脂酶抗体(C端) Anti-BCHECT 0.1ml

一种抑癌基因抗体 Anti-BECN1 0.1ml

  2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

  3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

  5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

  6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

  7.温育：操作同3。

  8.洗涤：操作同5。

  9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

  10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

  11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。