分离单核细胞的实验要点
发布时间：2017-03-23浏览次数：1043返回列表
单核细胞的分离
1. 离心后单核细胞存在于Percoll分层液（Ⅱ）和（Ⅲ）（密度较小的部分）之间的界面中。
2. 用毛细吸管仔细收集单核细胞。
3. 用含1-5%胎牛血清的 1×PBS液洗涤细胞3次，4℃，400×g离心5分钟，弃上清液。
4. 若需要进一步实验，将细胞重新悬浮于培养基中。
5. 用台盼蓝拒染法测定细胞存活率。
结果：本法回收的细胞中单核细胞占70-（存活率应大于90%），淋巴细胞占0-20%，粒细胞占0-5%，红细胞占0-7%，血小板小于0.5%。
实验要点
1.为了得到较好的结果，外周血单个核细胞分离后应立即使用。
2.所有操作过程应在18-20℃中进行。
3.仔细覆盖各种Percoll分层液，避免破坏其界面。
4.洗涤分离细胞3次，以除去残存的Percoll分层液和血小板。
5.如果所制备的细胞仍不纯，可使用包被有抗CD2、抗CD3、抗CD19抗体分子的磁珠，以除去残存的NK、T、B淋巴细胞。
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