HR8786 ROS活性氧检测试剂盒(cellRox Green)

本产品中的CellROX Green本身荧光较弱，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，氧化产物可掺入染色体DNA中，荧光强度增大，产生明亮的绿色荧光。根据活细胞中绿色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。...

ROS活性氧检测试剂盒(cellRox Green)

 

产品编号：HR8786

产品组成：

保存条件：

-20℃避光保存。有效期6个月。

【注】：

● 探针长期不用可以-20℃保存，避免反复冻融，可以根据需要分装后冻存。

● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

产品简介：

活性氧(ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)。超氧阴离子遇水生成H₂O₂，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(MAO)的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。

本产品中的CellROX Green本身荧光较弱，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，氧化产物可掺入染色体DNA中，荧光强度增大，产生明亮的绿色荧光。根据活细胞中绿色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。在激发波长488nm，发射波长520nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内活性氧水平。

ROS活性氧检测试剂盒(cellRox Green)产品特点：

● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

● 背景低，灵敏度高；

● 线性范围宽，使用方便。

检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦 ● 荧光酶标仪 ● 荧光光度计

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长488nm，发射波长520nm。

● 离心机 ● 移液器 ● PBS缓冲液 ● 或者HBSS（无酚红） ● 黑色96孔板

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● CellROX Green在光照和空气中易被氧化，注意避光密闭保存。

● 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化，很多细胞内的ROS绝对水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。

● CellROX Green探针可以根据需要的用量分装后冻存，避免反复冻融。

● CellROX Green不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

● 原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。

使用方法：

CellROX Green探针配制：

根据需要用量，用新鲜无酚红无血清培养基或HBSS稀释CellROX Green探针后充分混匀，避光保存备用。

2、探针使用终浓度200-1000倍稀释。一般预实验起始浓度按500倍即可。

【注】：

● 不能用含有血清的培养基稀释探针。

● 也可以用HBSS缓冲液或PBS稀释探针。

● 如果荧光太强，超过仪器的检测范围，可以按照1:1000-5000稀释探针。

CellROX Green探针标记：

1、CellROX Green溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液或组织灌流液中稀释到所需浓度，终浓度200-1000倍稀释，以此染色液更换细胞培养基或灌流液；也可直接向无血清细胞孵育液体或灌流液中加入CellROX Green探针溶液至所需浓度。

【注】：

● 检测贴壁细胞时，荧光显微镜检测可以原位染色也可以消化下来后染色，流式检测消化下来后染色。

2、依据细胞ROS含量的不同，CellROX Green终浓度可选择在200-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择30分钟-4小时，在37℃或室温进行避光孵育。

【注】：

● 如果荧光太强，超过仪器的检测范围，可以按照1:1000-5000稀释探针。

3、孵育结束后，用PBS等新鲜缓冲液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。

【注】：

● 也可以用HBSS/PBS洗涤细胞。

ROS活性氧检测试剂盒(cellRox Green)荧光显微镜观察：

1、对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2、荧光显微镜下观察。

流式细胞仪分析：

1、染色并洗涤细胞后用0.5～1 mL冷PBS重悬细胞（5～10万）。

2、采用488nm波长激发，发射波长520 nm，测定待测细胞平均荧光强度。

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