HR9105 细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)

细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)是一种利用荧光探针O09进行活性氮检测的试剂盒。O09探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的RNS氧化，产生红色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中红色荧光的产生和强弱，可以判断细菌细胞RNS含量的变化情况。...

细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)

 

产品编号：HR9105

产品组成：

储存条件：

探针-20℃，避光保存；稀释液2-8℃保存。有效期6个月。

【注】

● 探针短期内经常使用可以2-8℃保存。长期不用-20℃保存。

● 避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。

● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)产品简介：

细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)是一种利用荧光探针O09进行活性氮检测的试剂盒。O09探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的RNS氧化，产生红色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中红色荧光的产生和强弱，可以判断细菌细胞RNS含量的变化情况。

在激发波长516nm，发射波长606nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可检测荧光强度的设备，可以方便测定荧光情况，从而测定细菌胞内活性氮水平。

产品特点：

● 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

● 背景低，灵敏度高；

● 线性范围宽，使用方便。。

检测方法：

● 荧光分光光度计、荧光酶标仪 ● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 各种革兰氏阳性、阴性细菌

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长516nm，发射波长606nm。

● 移液器 ● 离心机 ● PBS ● 或者HBSS

使用注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● O09在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

● 对不同的细菌样本，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察RNS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。

细菌活性氮(RNS)检测试剂盒(红色,O09)使用方法：

O09探针工作液配制：

1、根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。

2、根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B 将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。

【注】:

● 工作液浓度应根据不同细菌的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500-5000倍稀释，1000-2000倍适合大多数细菌样本。

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 如果用不完，不可以一次性将探针全部稀释。

O09探针标记：

1、准备1mL 新鲜待测菌液。

【注】:

● 大约1×10⁸细胞/mL。

● 根据自己的实验需要，看是否需要细胞计数。采用绝对计数或者OD600-660 比浊均可。

2、将待测细菌样本离心收集菌体。

3、用PBS 洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。

4、用500μL-1mL 染色工作液重悬菌体。

5、在37℃避光孵育30分钟。

6、孵育结束后，离心收集菌体。

7、用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。

8、用500μL PBS重悬菌体。充分混匀。

9、取200μL加入荧光检测用96孔板。

10、置于酶标仪中，后于激发波长为516nm、发射波长606nm检测荧光强度。

结果处理：

荧光强度强表示细菌活性氮强度高。

【注】：

● 荧光强度强则活性氮（RNS）含量高。

● 可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准，待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较活性氮（RNS）程度差异。

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