HR0612 Ca2+钙离子染色试剂盒(F03绿色荧光)

F03细胞内钙离子染色试剂盒是利用F系列Ca2+钙离子荧光探针进行钙离子特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的F03细胞内钙离子染色探针为绿色荧光标记的钙离子探针,具有505/525nm的最大激发/发射波长。...

Ca²⁺钙离子染色试剂盒(F03绿色荧光)

 

产品编号：HR0612

产品组成：

储存条件：

染料-20℃避光保存，有效期6个月。

【注】：

● 染料短期2周内可以2-8℃保存,长期不用可以-20℃保存,避免反复冻融。

● 染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴,吸头也需要放在培养箱预热,否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

Ca²⁺钙离子染色试剂盒(F03绿色荧光)简介：

F03细胞内钙离子染色试剂盒是利用F系列Ca²⁺钙离子荧光探针进行钙离子特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的F03细胞内钙离子染色探针为绿色荧光标记的钙离子探针,具有505/525nm的最大激发/发射波长。

F03具有极高的细胞渗透性,经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的F03新产物,从而被滞留在细胞内。F03游离配体几乎是非荧光性的,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是,当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光,荧光会增加60至100倍,被激发后可以发出绿色的荧光,具有很高的淬灭常数和激发态寿命。最大激发波长为505nm,最大发射波长为525nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右,发射波长为515-530nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

F03荧光探针采用可见光激发,与传统的紫外光激发的荧光探针相比,仪器的适用范围更广泛,具有更强的探针吸收性能,使得更低浓度的探针即可成功检测Ca²⁺变化,从而降低了对活细胞的光毒性,检测敏感度更高。

以96孔板每孔200μL染色液计,本试剂盒小包装可以染色50-500个样本。

检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS ● HBSS

使用注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装试剂开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。

● F03染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 用前,将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 染色后立即进行分析。

● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

● F03探针在水中的稳定性比较差,染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。

● F03探针对湿度比较敏感,每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密闭保存。不可使用含水的吸头。

● 试剂A母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。

● 可在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤）,Pluronic F127可以帮助F03更快进入细胞,不建议在Pluronic F127中长期保存F03溶液。

● 标记条件因细胞的种类而异,据不同样本实际染色结果做相应调整,每次正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

Ca²⁺钙离子染色试剂盒(F03绿色荧光)使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样本数量,用37℃培养箱预热的HBSS将F03荧光染料200-1000倍稀释,配制成染色工作液。

【注】：

● 也可以用相应的无血清培养基稀释F03染料至所需浓度。

● 开始实验前,使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度,建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500-1000倍稀释,500-1000倍适合大多数细胞样本。

● 建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,每次使用一管,试剂-20℃避光保存,一年稳定。

● 工作液需现配现用,避免反复冻存。

● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

● 若细胞在染色后不含染料的培养基中孵育,荧光信号会衰减。

2、细胞染色

悬浮细胞染色

（1）用PBS洗涤细胞2次。

【注】：

● 500×g离心5分钟。根据实验室平时离心细胞的离心力离心。

（2）加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×10⁶/mL。

（3）在37℃孵育细胞20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。

（4）加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS,再继续孵育40分钟。

（5）孵育结束,500×g离心5分钟。

【注】：

● 以下步骤均为洗涤细胞。根据实验室平时离心细胞的离心力和时间进行离心。

（6）弃上清液,再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。

（7）重复（5）,（6）步骤两次。

（8）加入HBSS重悬细胞,在37℃下再继续孵育20分钟。

（9）然后用该细胞进行荧光钙离子检测。

贴壁细胞染色

（1）用PBS洗涤细胞2次。

（2）细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。

【注】：

● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。

（3）37℃孵育细胞20-60分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。

（4）吸干染色工作液,用HBSS洗培养板或盖玻片2-3次,每次用预热的HBSS覆盖所有细胞,然后吸干培养基。

（5）加入HBSS,在37℃下再继续孵育20分钟。

（6）然后用该细胞进行荧光钙离子检测。

3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

激发波长为488nm,最大发射波长为525nm。

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