HR8258 细胞粘附检测试剂盒(C01绿色荧光)

细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、炎症介质反应等均可以影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。细胞粘附检测试剂盒含全套试剂，通过活细胞绿色荧光探针C01染色粘附的活细胞数量来反应细胞的粘附能力变化。激发和发射波长分别为488nm和520nm。...

细胞粘附检测试剂盒(C01绿色荧光)

 

产品编号：HR8258

产品组成：

储存条件：

包被液、洗涤液4℃；染色液开盖后2-8℃避光，长期不用-20℃避光。有效期1年。

【注】：

● 试剂A为无菌溶液，注意防止污染。

● 试剂B注意防潮；避免反复冻融。

● 染色液B为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 试剂拆封后请尽快使用完。

细胞粘附检测试剂盒(C01绿色荧光)产品简介：

细胞粘附是指细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间的粘附，细胞粘附是细胞维持形态结构与功能的生物现象，是细胞间信息交流的一种形式。而信息交流的可溶递质称细胞粘附分子(cell dhesion molecμLe,CAM)。细胞粘附分子是参与细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间相互作用的分子。 是一类独立的分子结构，是通过识别与其粘附的特异性受体而发生相互间的粘附现象。

细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、炎症介质反应等均可以影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。

细胞粘附检测试剂盒含全套试剂，通过活细胞绿色荧光探针C01染色粘附的活细胞数量来反应细胞的粘附能力变化。激发和发射波长分别为488nm和520nm。

本试剂盒含有包被液，使用方便快速，可以进行高通量检测。本试剂盒使用荧光法进行检测，如果需要比色法检测的，请选用我公司货号为HR0957的试剂盒。

产品特点：

● 方便：可用荧光显微镜、激光共聚焦、荧光酶标仪检测；

● 快速：最快1小时内即可完成实验；

● 灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；

● 准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。

检测方法：

● 荧光显微镜 ● 荧光酶标仪 ● 激光共聚焦

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 荧光酶标仪 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS或者HBSS（无酚红）

● 荧光检测专用的透明底黑色96孔板

使用注意事项：

● 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。

● 染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。

● 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰F值读数。

● 染色液B为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 由于试剂B的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

● 试剂B对湿度非常敏感，试剂B溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密闭保存。不可使用含水的吸头。

● 试剂B母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

细胞粘附检测试剂盒(C01绿色荧光)使用方法：

包被：

1、96孔板每孔加入100μL包被液。

2、将培养板置2-8℃过夜。

3、移除包被液。

4、干燥培养器皿。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥，至肉眼观察完全干燥。

5、用洗涤液洗涤1-3次。

细胞接种：

1、待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。

2、按5×10⁴细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。同时设立对照组，即孵育后不弃上清组。

3、放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。

4、取出培养板，吸弃培养基。

【注】：

●对照孔培养基不要吸除。

5、然后用相应的培养基洗涤2-3次。

【注】：

● 由于培养基中的血清等可能含有酯酶，导致C01细胞活性探针分解，会导致空白上升，所以需要用PBS洗涤数次直到完全洗净。

6、每孔加入100μL新鲜无血清培养基。

粘附率检测：

1、染色工作液的配制：

从冰箱中取出荧光染色试剂，室温溶解后混匀。

根据样品数按下列比例配制染色工作液。

用37℃培养箱预热缓冲液(如HBSS)或无血清培养基将 C01荧光染料10-50倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。

2、96孔板每孔加入10μL细胞染色液B工作液，37℃避光孵育15-30分钟。

3、加入100μL HBSS或无血清培养基。

4、用荧光酶标仪/激光共聚焦检测结果。最大激发波长488nm，最大发射波长分别为520nm。

5、细胞粘附率计算。

将各测试孔的荧光强度值减去空白孔(未加细胞孔)荧光强度值。各重复孔的荧光强度值取平均数。

细胞粘附率% =((F待测细胞-F空白)/(F对照细胞-F空白))×100

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