HR0459 Hoechst33258染色试剂盒

Hoechst33258染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA 染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。...

Hoechst33258染色试剂盒

 

产品编号：HR0459

产品组成：

Hoechst33258染色试剂盒储存条件：

染液2-8℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。试剂B 2-8℃保存。有效期6个月。

产品简介：

Hoechst33258染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA 染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33258比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33258排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色试剂盒可直接用于活细胞或组织的细胞核染色，也可用于固定细胞或组织的细胞核染色。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦 ● 移液器 ● 离心机 ● PBS或HBSS ● 4%多聚甲醛

注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 染色后立即进行分析。

● 染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

● 本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化，冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

● 根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。

● 活细胞原位染色可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育1-2小时，或更长时间。

● 以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法请参阅相关资料。

Hoechst33258染色试剂盒使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样品数用 PBS将Hoechst33258染色液10-100倍稀释，配制成染色工作液。

2、细胞涂片的制备：

贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。

对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000×g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1×10⁵/mL，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；

【注】：

● 也可不固定，直接染色，稍微延长染色时间。

3、用PBS洗涤涂片两次。

4、加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。

5、用纯水10倍稀释的试剂B洗涤涂片。

6、用荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

结果分析：

Hoechst 33258染色后，置于荧光显微镜下，选用340-350nm的激发光观察：

正常细胞的细胞核呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光，颜色有些发白。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

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