HR0273 细菌裂解液

细菌裂解液采用优质原料配制，用于细菌菌体的裂解，用于细菌蛋白提取，可以用于各种常见大肠杆菌、各种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌蛋白提取。本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。...

细菌裂解液

 

产品编号：HR0273

产品组成：

细菌裂解液储存条件：

裂解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制剂未开盖前也可以2-8℃保存，开盖使用后-20℃储存。

● 蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

产品简介：

细菌裂解液采用优质原料配制，用于细菌菌体的裂解，用于细菌蛋白提取，可以用于各种常见大肠杆菌、各种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌蛋白提取。

本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本裂解液中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（货号HR0389）。

细菌裂解液产品特点：

● 使用方便，从细胞、组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

● 提取过程简单方便。

● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

● 蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 超声细胞破碎仪 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 如果试剂盒不能短时间用完，蛋白酶抑制剂混合物不可一次全部加入提取液。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：

1、裂解液的准备：

根据所需提取的样本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

【注】：

● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2、在4℃,10000×g条件下将菌液离心10min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

【注】：

● 若为已经收集好的冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

3、用PBS洗菌体2次。

4、按每50-100mg湿重菌体样本加入500μL裂解液，混匀，冰上放置20-30分钟。

【注】：

● 每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

5、在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。

【注】：

● 超声时间尽量短，提取液变清即可，一般不超过20分钟。

● 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率过大，需要降低功率。

● 避免产生泡沫。

● 若无超声条件，可不超声，将菌体样本用液氮充分研磨。没有液氮研磨就用裂解液A直接研磨。

● 若无研磨条件，将上一步骤裂解液处理时间延长，持续振荡1-2小时。

● 如果没有振荡条件，可以静置，中间每隔10分钟混匀，至澄清。

6、在4℃，12000×g条件下将菌液离心10分钟，将上清移入冷的干净离心管。

7、即得到细菌总蛋白样品。

8、将细菌总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA方法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 细胞裂解速度慢？

为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。

● 蛋白浓度低？

处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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