SY0242 二甲基腔肠素

二甲基腔肠素由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要二甲基腔肠素等报告基因检测产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括二甲基腔肠素在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：二甲基腔肠素
英文名称：Coelenterazine 2-methyl
产品货号：SY0242
产品规格：50μg

本品为粉末形式供应的二甲基腔肠素，系天然腔肠素衍生物，具有、细胞膜通透性等特性，是一种细胞强抗氧化剂，可作用于细胞内的活性氧，如单态氧和超氧阴离子。由于氧化应激是细胞凋亡过程的中介环节，因此，二甲基腔肠素可能作为一种研究细胞凋亡的重要工具。另，二甲基腔肠素还可通过化学发光法来检测超氧阴离子和过氧亚硝酸阴离子水平。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源zuì丰富的天然荧光素，是大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。


图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用zuì普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择zuì合适的腔肠素底物。

英文别名：Coelenterazine, 2-methyl analog; Methyl Coelenterazine; 2-methyl Coelenterazine
CAS：N/A
分子式：C20H17N3O2
分子量：331.37
溶解性：溶于甲醇或乙醇
外观：黄色粉末
纯度：＞98%（TLC）
结构：


注意事项
1）二甲基腔肠素粉末zuì好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成二甲基腔肠素氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号	名称	规格
YT271	萤光素酶报告基因检测试剂盒(萤火虫)	100次|1000次
YT272	萤光素酶报告基因检测试剂盒(海肾)	100次|1000次
SY0059	NF-κB萤火虫荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0060	VDR萤火虫荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0062	STAT1萤火虫荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0063	SREBP荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0067	RBP-JK萤火虫荧光素酶报告基因质粒	1μg

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名称：β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒
货号：YT274
规格：200次
本试剂盒是一种用于β-半乳糖苷酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子，经常与荧光素酶报告基因一起转染细胞，被用作荧光素酶报告基因检测的内参照，从而消除因为质粒的转染效率不同而带来的误差。如果使用96孔板检测，足够测定200个样品。

试剂盒组份：
报告基因细胞裂解液——————100ml
β-半乳糖苷酶检测试剂 ————10ml
β-半乳糖苷酶反应终止液 ———35ml

百奥莱博的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒，是以无色的ONPG为底物，在β-半乳糖苷酶的催化下生成黄色的onitrophenol，然后通过酶标仪或分光光度计在420nm波长附近测定吸光度，从而实现对β-半乳糖苷酶活性的测定。

本试剂盒所提供的裂解液适合于动物细胞的裂解，通常不适合于细菌、真菌和植物细胞的裂解。

注意事项：
1. zuì佳测定波长为420nm。在410-430nm范围内测定，具有相近的灵敏度。
2. 本检测试剂盒和Promega荧光素酶报告基因的裂解液兼容。用Promega荧光素酶报告基因裂解液裂解的样品可以用本试剂盒测定。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
货号：SY0058
规格：100T|500T|1000T
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件（如启动子、增强子和沉默子等）和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit），是通过萤火虫荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin，在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光（bioluminomescence），然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

产品特点
1）简便，快捷。
2）灵敏度高，可检测10-20 mol的荧光素酶。
3）安全，非放射性。
4）酶的浓度线性范围可达8个数量级。

产品组份：

组分	100T	500T	1000T
细胞裂解液	60ml	60ml×5	60ml×10
萤火虫荧光素酶检测试剂	10ml	10ml×5	10ml×10

保存：未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为 6 个月。-70℃避光保存，有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）避光保存，不能反复冻融。

实验步骤

1. 细胞裂解：
1）将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入细胞裂解液（Cell lysis buffer），然后将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min，充分裂解细胞。

细胞培养板	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
细胞裂解液（µl/孔）	30µl	60µl	120µl	250µl	500µl

【注】：裂解产物可室温保存6h，4℃保存16h，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）。
2）将充分裂解后的裂解产物，10000-15000rpm离心3-5min。离心后将上清液移入新的EP管中进行后续检测。
2.荧光素酶检测：
1）按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为10s，测定间隔为2s。
2）将样品按照20～100µl的体积（如果样品量足够，请加入100µl）加入测量管中（保持每次样品的加样量一致），另外加入萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）混匀 2-3 次（不能漩涡混匀），充分混匀后测定RLU（Relative light unit），同时设置细胞裂解液（Cell lysis buffer）为对照孔。

注意事项
1）温度会对酶的活性会产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。
2）如用单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
3）萤火虫荧光素酶催化的生物发光的zuì强发光波长为 560nm。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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