BTN90903 无RNase的DNase溶液

无RNase的DNase溶液由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要无RNase的DNase溶液等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括无RNase的DNase溶液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：无RNase的DNase溶液
英文名称：RNase-Free DNase Solution
产品货号：BTN90903
产品规格：500U

本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase，专门用于降解RNA样品中的DNA污染。

产品特点：
1.，能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。
2. 同时降解单链DNA和双链DNA。
3. 不含RNase，可以保证RNA分子完整性不受任何影响。
4.反应条件经过优化，可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA，也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。
5.可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。也可用于切口平移(Nick Translation)和DNase印迹法研究DNA-蛋白质相互作用。

产品组成：

成分	规格
RNase-free DNase(1U/μL)	300μl
10×DNase Buffer	300μl
50mM EDTA溶液	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、去除RNA样品中污染的基因组DNA(仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1.在一无RNA酶的离心管中配制50μl的反应液：

成分	用量
RNA样品	1μg
10×DNase Buffer	1μl
RNase-free DNase(1U/μL)	1μl
自备的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(可不加)
补超纯水到	10μL

2. 混匀，短暂离心，37℃放置30分钟；
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/氯fǎng抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp
试剂盒进行柱式纯化，回收RNA。
4.电泳检测是否去除了基因组 DNA，然后进行后续实验。

二、除去硅胶膜离心吸附柱上的DNA(仅供参考，本试剂盒不含 RNase-free DNase以外的所需试剂)
1.在柱式法提取过程中，完成洗涤步骤。
2. 配制 50μl DNase工作液。

成分	用量
10×DNase Buffer	5μl
RNase-free DNase(1U/μL)	10μl
自备的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(也可不加)
补超纯水到	50μL

3. 加在离心吸附柱中间，室温放置5-30分钟。
4. 加入0.5mL自备洗柱液洗涤两次。
5. 用RNA洗脱液洗脱即得无DNA的RNA样品。

三、除去RNA体外转录反应中的DNA模板(仅参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1. 按2 U RNase-free DNase/μg DNA模板的比例在RNA体外转录反应中加入RNase-free DNase。注意：酶的zuì佳用量也许需要优化。
2. 37℃放置15分钟。
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分钟；此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/氯fǎng抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp试剂盒(需另购)进行柱式纯化，回收RNA。

四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA探针标记(仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1. 按下表设置切口平移标记反应：

成分	用量
10×DNA聚合酶I缓冲液	2.5μl
3 dNTP mixture，1mM each	1.25μl
标记核苷酸：非标记核苷酸混合(3：7，1mM)	1μl
RNase-free DNase(0.002U/μL，见注)	1μl
DNA聚合酶 I(10U/μL)	0.5-1.5μl
模板 DNA	0.25μg
加水到	25μl

注：稀释 RNase-free DNase的缓冲液为1×DNA聚合酶 I缓冲液：50mM
2. 15℃放置 15-60分钟。
3. 加入10μl 50mM EDTA溶液。
4. 65℃放置 15分钟灭活酶。
5. 所得探针可以纯化后使用，也可以直接使用。


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名称：柱式细菌RNA提取试剂盒
货号：BTN80103
规格：50次
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1. 操作更加简单快速，省去了zuì费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性细菌。
5. 高于进口同类产品。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用zuì新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯fǎng(1mL 裂解物需 0.2mL 氯fǎng)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
5. 12000～15000g室温离心 3～5分钟。
6. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下 100μL上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9.室温 12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
11.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼酸络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 zuì好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我们的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有残留 RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。

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