WH0157 高通量96孔板DNA产物纯化回收

高通量96孔板DNA产物纯化回收由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，我公司的高通量96孔板DNA产物纯化回收品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括高通量96孔板DNA产物纯化回收试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高通量96孔板DNA产物纯化回收试剂盒
英文名称：96wells DNA Product Purification and Recovery Kit
产品货号：WH0157
产品规格：4×96孔|24×96孔板

本试剂盒通过96孔吸附板特异性地结合酶切、PCR、测序等反应溶液中的DNA片段，可除去蛋白质、有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。纯化的DNA可适用于限制性酶切、测序、文库筛选，连接和转化等分子生物学实验。

产品特点：
·回收100bp-10kb DNA片段，回收率可达80%以上。
·每孔zuì多可吸附的DNA量为5μg。
·纯度高：可直接用于下游实验。

提取流程：


提取实例：

使用本试剂盒纯化900bp，3500bp，4500bp片段。50μl洗脱，3μl上样，琼脂糖凝胶浓度为1%，6V/cm电泳20min，1、2、3为本试剂盒纯化，4是使用某进口品牌试剂盒纯化。

组分	4板	24板
平衡液BL	240ml	3×500ml
结合液PB	240ml	3×500ml
漂洗液PW	3×50ml	2×500ml
洗脱缓冲液TB	60ml	240ml
半裙边96孔吸附板CB2	4板	24板
96孔深孔板	8板	48板
250ml试剂瓶	-	1个
封口膜	4张	24张

储存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有DNA片段（可去除30 bp以下的小片段），如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。
2．回收得率与DNA初始量及洗脱体积有关。DNA初始量越低，洗脱体积越少，回收得率越低。洗脱体积zuì好不要少于每孔60μl。
3．每次使用前取50ml漂洗液PW并加入200 ml无水乙醇摇匀后使用。
4．使用前请先检查平衡液BL是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
5．实验前使用平衡液BL处理吸附板，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
6．用平衡液BL处理过的板子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

操作步骤：（离心法)
1．板平衡步骤：将96孔吸附板CB2叠放在96孔深孔板上，每孔中加入500 μl的平衡液BL，3,600rpm（～2,130×g)离心3 min，弃废液，将吸附板重新放回深孔板上。（请使用当天处理过的吸附板）
2．估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入3倍体积的结合液PB。
  举例：如PCR反应体系为100 μl （不包括石蜡油体积)，则加入300 μl结合液PB。如果混合液体积超过PCR管的体积，可将PCR反应液或者酶切反应液转移到96孔深孔板中，与结合液PB进行混合再进行下游实验。
3．充分混匀后转移所有上述混合液到步平衡过的96孔吸附板CB2中。室温放置2 min，3,600rpm（～2,130×g)离心5 min，弃废液，将吸附板重新放回同一深孔板中。
  注意：单孔吸附柱容量为700 μl，若样品体积大于700 μl可分批加入离心。
4．向96孔吸附板CB2每孔中加入700 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，3,600rpm（～2,130×g)离心3 min，弃废液，将吸附板重新放回同一深孔板中。
5．重复操作步骤4。
6．3,600rpm（～2,130×g)离心10min，目的是将吸附板中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
7．将96孔吸附板CB2置于一个新的96孔深孔板中，向吸附板各孔膜的中间部位悬空滴加80-100 μl ddH2O（pH≥7.5）或洗脱缓冲液TB，室温放置5 min，3,600rpm （～2,130×g)离心10min收集DNA溶液。
  注意：通常80 μl的洗脱液平均洗脱得到50 μl的DNA产物。为提高得率，可以增加洗脱液体积。此外，若用ddH2O洗脱应保证其pH值在7.0-8.5范围内。

操作步骤：（负压法)
1．正确连接负压装置，将96孔吸附板CB2置于负压装置上；向96孔吸附板CB2每孔中添加200 μl平衡液BL，开启并调节负压，吸尽板中溶液。
2．在PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加3倍体积的PB；混合均匀后转移到平衡过的96孔吸附板CB2中，室温放置2 min，开启并调节负压吸尽板中溶液。
3．向96孔吸附板CB2中每孔添加200 μl漂洗液PW，吸尽板中溶液。
4．重复第3步骤。
5．以zuì大负压将96孔吸附板CB2抽吸10min。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
6．导流管朝下将96孔吸附板CB2于吸水纸上用力拍击6次。
7．将96孔吸附板CB2置于96孔深孔板上，在膜正中央加80-100 μl ddH2O（pH≥7.5）或洗脱缓冲液TB，室温静置5 min。3,600rpm离心10min收集DNA溶液。
8．在该96孔深孔板上覆盖一张新的封口膜，DNA溶液保存于-20℃备用。

DNA浓度及纯度检测：
1．DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

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名称：红细胞裂解液A型(核酸纯化)
货号：BTN60403
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.快速，一次处理只需要2-3分钟。处理后提取血液DNA可以不需要酚/lǜ仿去蛋白质。
2.，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，一般样品zuì多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以与市场上大多数血液DNA提取试剂盒结合使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在装有抗凝血液的离心管中，按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000 g室温离心2分钟，小心吸弃弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于1/2 体积的红细胞裂解液A型中，轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4.沉淀即为去除了红细胞的血液细胞，可以直接用于后续的实验。

名称：血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
货号：BTN120810
规格：25次
本试剂盒是在本公司血液DNA提取试剂盒产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。

产品特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2. DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50μg/mL 新鲜血液，线粒体DNA产率约为1μg/mL 新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5. 所用试剂安全，健康环保。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白细胞核和线粒体的分离
1. 将3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。注意：zuì好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA 得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2. 向血液中加入等体积(3mL)的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000 g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清(含线粒体)到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mL D型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000 g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清(含线粒体)到第4 步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。
将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 将汇集的含线粒体的上清于4℃下15000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mL D型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9. 用1mL D型红细胞裂解液洗涤线粒体2次(每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀)。
10. 所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用)
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75μL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12. 再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清(含DNA)转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14. 加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000 g离心5分钟，去尽上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16. 重复上步一次。
17. 短暂离心，去尽残留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暂晾干半分钟，加入适量DNA 洗脱液2.0 溶解DNA(对细胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50μL DNA 洗脱液2.0)。
19. 65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD 检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。

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