BTN81024 大肠杆菌DH5α化学感受态细胞

大肠杆菌DH5α化学感受态细胞由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多大肠杆菌DH5α化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括大肠杆菌DH5α化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
英文名称：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
产品货号：BTN81024
产品规格：0.1mL*10

 本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率不低于107，适用于的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
 本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。

基因型	表现型
deo R	组成型合成脱氧核糖
end A1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重组活性降低
Rel A1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突变突变，为某些噬菌体必需
thi-1	不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互补所需的ω片断

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号	名称	规格
BTN130803	pression/BTN130803.html" target="_blank">单细胞裂解液(DNA提取)	1mL
BTN130805	pression/BTN130805.html" target="_blank">单细胞悬浮液	1mL
BTN140218	pression/BTN140218.html" target="_blank">大肠杆菌DB3.1化学感受态细胞	10*100μl
BTN90504	pression/BTN90504.html" target="_blank">大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞	0.1mL*10
BTN120692	pression/BTN120692.html" target="_blank">硫酸庆大霉素	2mL
YT475	pression/YT475.html" target="_blank">N端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)	1μg
YT476	pression/YT476.html" target="_blank">N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)	1μg

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名称：DNA磷酸化试剂盒
货号：BTN130813
规格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。

成分	规格
10×TPK缓冲液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5′端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
PCR胶回收片段	2μL(不超过10pmol)
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
单链DNA片段	5-10 pmol
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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