WH0202 rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大

rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大是高品质的RNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大鼠)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大鼠)
英文名称：rRNA Depletion Kit
产品货号：WH0202
产品规格：6次|24次|96次

本试剂盒采用特殊设计的DNA探针与核糖体RNA（rRNA）杂交，随后利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA杂交链中的rRNA，从而去除人、小鼠、大鼠总RNA中的细胞质核糖体RNA（28S、18S、5.8S、5S）和线粒体内核糖体RNA（16S、12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非编码RNA。

该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果，所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序，可显著提高测序结果中有效数据比例，纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。

产品特点：
·样本广泛：适用于高质量（完整）及部分降解（如FFPE）样本中rRNA的去除。
·去除：有效去除95~99.9%的人/小鼠/大鼠的rRNA。
·数据：保留了不完整mRNA和非编码RNA信息，使转录组数据更加。
·快速评估：试剂盒中提供的引物可快速评估rRNA的去除效果。

产品组成：

组分	6次	24次	96次
Ribo Hybridization Probe（H/M/R)	6μl	24μl	4×24μl
5×Hybridization Buffer	18μl	72μl	4×72μl
Ribo RNase H	6μl	24μl	4×24μl
5×RNase H Buffer	24μl	96μl	4×96μl
Ribo DNase I	6μl	24μl	4×24μl
10×DNase I Buffer	30μl	120μl	4×120μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml	8×1ml
rRNA Primer Mix	12μl	48μl	4×48μl
mRNA Primer Mix	12μl	48μl	4×48μl

储存条件：-20℃保存，保质期为一年，尽量避免反复冻融。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2．请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、离心管进行实验。
3．实验开始前，请清洁操作台，建议使用RNA酶及DNA酶清除试剂处理台面。确保没有RNA酶和DNA酶的污染。

推荐使用的其他试剂：
1．去除rRNA的RNA纯化：RNA Clean Beads （Cat#NG307)。
2．PCR检测rRNA去除效率，QuickKing RT Kit （With gDNase)（Cat#KR116),SuperReal PreMix Plus（SYBR Green)（Cat#WH0103)。

操作流程示意图：


操作步骤：

一、探针与rRNA杂交
1．在200μl Nuclease-Free PCR管中，用RNase-Free ddH2O将100~1000ng人/小鼠/大鼠的总RNA稀释至11 μl，冰上放置备用。
  注意：总RNA样品中应无DNA、盐离子（例如Mg2+、胍盐）、有机试剂（例如酚、乙醇）残留，否则可能导致非预期的RNA降解或去除效率降低。
2．参照下表配制探针反应液：

成分	使用量
5×Hybridization Buffer	3μl
Ribo Hybridization Probe（H/M/R)	1μl

3．将步骤2的4 μl探针反应液加入到步骤1装有11 μl RNA样品的PCR管中，用移液器吸吹混匀10次。
4．瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖99~105℃均可），按以下程序操作，总共耗时约20min。
  注意：必须慢速降温（每秒降温0.1℃)，使探针与rRNA充分杂交。

步骤	温度	时间
1	95℃	2min
2	95 to 22℃	0.1℃/sec
3	22℃	5min hold

5．瞬时离心，并置于冰上，立即进入下步操作。

二、Ribo RNase H消化rRNA
1．参照下表在冰上配制Ribo RNase H反应液，并用移液器吸吹混匀10次。

成分	使用量
5×RNase H Buffer	3μl
Ribo RNase H	1μl

2．将5 μl Ribo RNase H反应液加入步骤一的产物中，构成20 μl反应体系，用移液器吸吹混匀10次。
3．瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖40℃），37℃孵育30 min。
4．瞬时离心，将样品置于冰上，立即进入下步操作。

三、Ribo DNase I消化探针
1．参照下表在冰上配制Ribo DNase I反应液，并用移液器轻轻吸吹混匀10次。

成分	使用量
RNase-Free ddH2O	24 μl
10× DNase I Buffer	5 μl
Ribo DNase I	1 μl

2．将30 μl Ribo DNase I反应液加入步骤二的产物中，构成50 μl反应体系，用移液器吸吹混匀10次。
3．瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖40℃），37℃孵育30 min。
4．瞬时离心，将样品置于冰上，立即进入下步操作。

四、RNA纯化
推荐使用磁珠纯化产品RNA Clean Beads（Cat#NG307)，也可使用Agencourt RNAClean XP（Beckman Coulter)。
1．涡旋振荡混匀RNA Clean Beads，吸取110 μl （2.2倍体积）至步骤三的50 μlRNA产物，用移液器吸吹混匀10次。
2．冰上静置15 min，使RNA充分结合到磁珠上。
3．将样品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，用移液器小心移除上清。
4．保持样品始终处于磁力架上，加入200μl新鲜配制的80%乙醇（每次实验需要新鲜配制，因为乙醇易从空气中吸收水分，浓度降低影响实验效果）漂洗磁珠（不要吹散磁珠），室温孵育30 sec，小心移除上清。
5．重复步骤4进行漂洗。
6．取出离心管短暂低速离心（<2000g,10 sec)，使液体收集至管底，将样品放回磁力架，用移液器小心弃去所有液体。
7．保持样品始终处于磁力架上，开盖晾干磁珠3～5 min （不要过度干燥，否则可能降低RNA回收率。洗脱应当在磁珠依然显深棕色且光亮，而且所有可见液体已完全挥发时进行。若磁珠出现裂缝，则表示已过度干燥）。
8．将样品从磁力架上取出，加入12 μl RNase-Free ddH2O （或适合下游实验的相应体积ddH2O或洗脱缓冲液），用移液器吹打10次混匀磁珠，室温静置2 min。
9．在磁力架上静置2 min，待溶液澄清后，不要触动磁珠，小心吸取10 μl上清（可根据步骤8选择的实际洗脱体积进行相应调整，尽量充分利用洗脱产物）至新的Nuclease-Free PCR管。
10．洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用，也可在-20℃保存过夜或在-80℃保存7天。

五、Real-time PCR检测（可选步骤）
本试剂盒提供两对定量PCR引物，分别为18S rRNA的rRNA Primer Mix和beta-actin的mRNA Primer Mix。建议以不进行处理的等量初始总RNA为对照（需用RNase-Free ddH2O或洗脱缓冲液稀释至洗脱体积），以评估rRNA去除效率和mRNA损失比例。
两步法举例：逆转录用1μl的RNA产物作模板，合成链cDNA，然后定量PCR用2 μl cDNA作模板。试剂盒使用QuickKing RT Kit（With gDNase)（Cat#KR116)和SuperReal PreMix Plus （SYBR Green)（Cat#WH0103)。

根据您的关注的rRNA去除试剂盒（人/小鼠/大鼠)，核糖体RNA清楚试剂盒，核糖体RNA去除试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：植物RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN71203
规格：50次
本试剂盒是植物RNA提取试剂盒(BTN3080)的柱式升级产品，它结合了BTN3080性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见BTN3080产品介绍的附录)和百奥莱博柱式纯化系列产品的快捷性。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟，比植物RNA提取试剂盒快一倍。
2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
3.小RNA回收效率更高。
4.适用于所有用植物RNA提取试剂盒能提出RNA的植物(注:对有些植物可能需要在溶液A中额外添加RVC)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
6. 高于进口的柱式植物RNA提取产品。
7.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

注：溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备lǜ仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μL上清液不取。
7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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货号	名称	规格
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