YT393 M-MuLV反转录酶

北京百奥莱博供应的M-MuLV反转录酶用于生化实验研究等领域，我公司的M-MuLV反转录酶品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括M-MuLV反转录酶(RNase H-)(逆转录酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：M-MuLV反转录酶(RNase H-)(逆转录酶)
英文名称：M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase H minus)
产品货号：YT393
产品规格：2000U

本品是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶(RNase H-)。和普通的M-MuLV反转录酶相比，M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶，可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成；但缺失了Ribonuclease H(RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA。M-MuLV反转录酶(RNase H-)是zuì常用的反转录酶之一。

特点：M-MuLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达13kb的cDNA，而普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)仅能合成长达9kb的cDNA；M-MuLV反转录酶(RNase H-)的zuì适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。

用途：M-MuLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA条链的合成。M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成的cDNA条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。M-MuLV反转录酶(RNase H-)也可以用于DNA探针的标记，通过引物延伸(primer extention)来分析RNA，以及用于基因芯片荧光探针的标记。

来源：本M-MuLV反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达，表达的基因为经过突变优化的编码Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片段。

活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at 37℃. Enzyme activity is assayed in 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 40 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA条链等的需要。

酶储存溶液：50 mM Tris, pH 8.3, 100mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

Reaction Buffer(5X)：250 mM Tris, pH 8.3 at 25℃, 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。

失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MuLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对M-MuLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

本产品中M-MuLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

储存条件：-20℃。

根据您的关注的M-MuLV反转录酶(RNase H-)(逆转录酶)，您可能还对以下产品有需求：



名称：Therminator II DNA聚合酶
货号：BTN131196
规格：100U
Therminator II DNA聚合酶是9°Nm DNA聚合酶中的一种，但有较强的修饰底物掺入能力，如dNTP、rNTP和acyNTP。Therminator II DNA聚合酶是Therminator DNA聚合酶的衍生物，前者比后者多了一个氨基酸突变。这种改变提高了rNTP和3′功能基团经修饰核苷酸的掺入效率。

产品特点：
1．提高了修饰核苷酸特别是rNTP的掺入能力；
2．部分核糖核酸置换法测定DNA序列；
3．ddNTP或acyNTP的链终止法测序；
4．ddNTP或acyNTP链终止法测序用于SNP分析。

产品组成：

成份	规格
Therminator II DNA聚合酶(2000U/mL)	50μL
10×Buffer	1.5mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指75℃条件下，30分钟内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

名称：RNase H
货号：YT511
规格：100U
本酶是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。

特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。
用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
来源：E.coli MRE-600细胞。
分子量：约18.4kDa(单体)。
活性定义：37℃20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶储存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶或RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X)————2µl
无核酸酶去离子水——————217.8µl
RNase H (5U/µl)——————20.2µl
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5µl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。

2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶(YT392)、RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(YT393)或cDNA 链合成试剂盒(RNase H-)(YT395)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I————8µl
无核酸酶去离子水—————————————————68.8µl
RNase H (5U/µl)—————————————————0.2µl
DNA Polymerase I, E.coli—————————————3µl (30U)
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e. 加入5µl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。

3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

关注M-MuLV反转录酶(RNase H-)(逆转录酶)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN3160	RNase A溶液(10mg/mL)	1.5mL
YT403	T4 DNA聚合酶	50U
YT406	Klenow片段	100U
YT510	Klenow片段(无外切酶活性)	100U
WE0225	RNase A溶液(100mg/ml)	1ml
SV0005	Acc65I限制性内切酶	10KU|2KU|1KU
SV0038	AluI限制性内切酶	5KU|1KU|500U

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