JN0094 100bp DNA Ladder

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括100bp DNA Ladder在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括100bp DNA Ladder ODD Plus在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：100bp DNA Ladder ODD Plus
产品货号：JN0094
产品规格：500μl(100次)

  本DNA Marker为预混1×Loading Buffer的DNA溶液，可直接电泳。100bp DNA Ladder ODD Plus在100bp DNA Ladder ODD基础上增加了2000bp和3000bp两个条带。

片段组成：
100bp，300bp，500bp，700bp（加亮），900bp，1100bp， 1500bp，2000bp，3000bp，其中500bp条带浓度加倍，约为30 ng/μl，显示为亮带，使电泳结果更容易辨认，亦可用于定量。

储存条件：-20℃，有效期2年。

图1：DNA Marker电泳图


图2：DNA Marker条带示意图


表1：DNA Marker选择指南

目的条带分子量范围 （推荐琼脂糖%）	标准分辨率	高精分辨率
1500bp以下 (1.0%到2.0% Agrose)	200bp DNA Ladder	100bp DNA Ladder
	200bp DNA Ladder Plus	100bp DNA Ladder Plus
	100bp DNA Ladder ODD	DNA Ladder 2000 Plus
	100bp DNA Ladder ODD Plus	DIY DNA Marker(条带任选)
	DNA Ladder 2000
1500bp以上 (0.7% Agrose)	DNA Ladder 3000	1kb DNA Ladder I
	DNA Ladder 5000	1kb DNA Ladder II
	DNA Ladder 9000	1kb DNA Ladder Plus I
	DNA Ladder 10000	1kb DNA Ladder Plus II
	λ/Hind III DNA Marker	DIY DNA Marker(条带任选)

表2：DNA Marker系列一览表

DNA Marker	条带组成(bp)	琼脂糖(%)
100bp DNA Ladder	100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000	1.5%
100bp DNA Ladder Plus	100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1500、2000	1.0%
100bp DNA Ladder ODD	100、300、500、700、900、1100、1500	1.5%
100bp DNA Ladder ODD Plus	100、300、500、700、900、1100、1500、2000、3000	1.0%
200bp DNA Ladder	200、400、600、800、1000、1200、2000	1.5%
200bp DNA Ladder Plus	200、400、600、800、1000、1200、2000、3000、5000	1.0%
DNA Ladder 2000	100、250、500、750、1000、2000	1.0%
DNA Ladder 2000 Plus	100、250、500、750、1000、2000、3000、4000、5000	1.0%
DNA Ladder 3000	100、250、500、750、1000、1500、2000、3000	0.7%
DNA Ladder 5000	100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000	0.7%
DNA Ladder 9000	500、1000、2000、3000、5000、9000	0.7%
DNA Ladder 10000	500、1000、2000、4000、7000、10000	0.7%
1kb DNA Ladder I	500、1000、 2000、3000、4000、5000、6000、8000	0.7%
1kb DNA Ladder Plus I	100、250、500、750、1000、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、8000	0.7%
1kb DNA Ladder II	500、1000、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000	0.7%
1kb DNA Ladder Plus II	100、250、500、750、1000、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000	0.7%
λ/Hind III DNA Marker	125、564、2027、2322、4361、6557、9416、23130	0.6%
DIY DNA Marker(条带任选)	100、200、250、300、400、500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000等24个fregment任选	详情请参考说明书

根据您的关注的100bp DNA Ladder ODD Plus，您可能还对以下产品有需求：

货号	名称	规格
BTN90313	TBE电泳液，10×	250mL
BTN70503R	DNA marker(100-2000bp)	50次
BTN70503Y	DNA marker(100-5000bp)	50次
BTN120654F	Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)	20次
BTN110801	核酸浓缩剂	30mL
YT418	DNA上样缓冲液(6X)	2ml

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名称：绿如蓝核酸染料(UV)
货号：BTN70303
规格：1.5mL
目前zuì常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花氰类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热)，实验结果的重复性往往不尽人意；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA 条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料

产品特点：
1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景zuì低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，但操作时zuì好还是戴上塑料手套。

使用方法之一：电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN，混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl，否则背景将很强。注意：一定要保证琼脂糖彻底熔化，尤其是在次熔化胶的时候，否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意：一定要使用不含SDS等去污剂的上样液，否则SDS 会跟染料结合，大地降低灵敏度。
3.上样后电泳，电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2，需要较高电压，详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意：不要使用波长为260nm或360nm的UV，否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高，还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下)，避免UV 对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。
 注：显色结果：在紫外下，DNA浓度非常高的时候是白色，浓度低的时候是绿色的，单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。

使用方法之二：电泳后染色DNA
本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理，染料用量较大，不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN)，将凝胶放入，室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟，具体时间需根据背景强弱决定，其余同方法一。
 注意：电泳后染色液可以反复使用次数。

疑难解答：
Q：本产品可否用于RNA染色？
A：可以，不论RNA是在甲醛变性胶中电泳，还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳，RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q：本产品是否可以加入上样液中进行染色？
A：不行，本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q：为何前端(靠近正)的DNA 条带很淡或根本看不见？
A：跟EB一样，电泳时DNAGREEN 朝负方向移动，当前端的DNA(zuì小片段)进入没有DNAGREEN的区域时，已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落，所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色；之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q：本产品在哪种缓冲液中效果zuì好？
A：DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同，从弱到强的顺序是：
 SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中，可以适当降低染料的用量，比如100mL胶中加3-5μl。zuì佳浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正)的胶呈白色，后面的胶呈黑色？
A: DNAGREEN染料带正电，电泳时往上走，胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
 本产品在TAE中背景zuì强，可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q：用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象？
A：SYBR染料一般与DNA的小沟结合，但在常规电泳条件下该结合并不牢固，染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移，使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时)，发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固，则无此现象。
Q：核酸染料是否都有毒性？
A：核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
 一是染料的膜通透性，EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小，容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍，但毒性很小，就是由于其分子比EB大，不能透过细胞膜，所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒，但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解，不能使用水溶液做溶剂)中，所以如果溅到皮肤表面，更容易进入皮肤。
 二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解，一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长，增加了毒性；而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定，比较容易自然降解，所以毒性自然较低。
 三是降解产物是否有毒性，比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大，而有的染料降解产物毒性却低很多，甚至。
 四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合，很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中，因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
 五是细胞修复突变的能力，正常人体都有很强的修复突变的能力，如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之，一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。

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