WE0287 SDS-PAGE分离胶缓冲液

SDS-PAGE分离胶缓冲液由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科学研究，我公司的SDS-PAGE分离胶缓冲液品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
英文名称：SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)
产品货号：WE0287
产品规格：500ml

  本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，zuì佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与zuì佳分离范围

SDS-PAGE 分离胶浓度	zuì佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	分离胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	浓缩胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃

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货号	名称	规格
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名称：动植物总蛋白微量提取试剂盒
货号：BTN90707
规格：50次
本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。

产品特点：
1. 提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2. 采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
5×SDS-PAGE上样液	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
使用前，zuì好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。

一：匀浆法
 注意：对致密的实体组织(如肌肉)，zuì好用Polytron 式匀浆机匀浆处理。
1. 称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。
2. 加入1ml溶液A，在冰上用Polytron 式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3. 将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000 g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法(如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

二：直接研磨法
 注意：可以使用玻璃和陶瓷的研钵，也可以使用与微量离心管式的研磨杵(BTN80603)
1. 称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到预冷的研钵或离心管中。
2. 加入1ml溶液A，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可见的组织块。
3. 将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法(如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

三：液氮研磨法
 注意：zuì好使用玻璃和陶瓷的研钵
1. 取大约100mg动物或植物组织样品，转移到预冷的研钵中。
2. 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。
3. 加入1ml溶液A溶解，然后将溶液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000 g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法(如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5× SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

注意事项：
1．如果4℃ 12000g离心10分钟后得到的上清液中还有可见的沉淀，可以将上清转移到一个新的离心管中后再4℃ 12000g离心10分钟，以去除可见的小碎片。
2．植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质，可以在zuì后得到的上清液中加入5倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置1小时或过夜，然后4℃,12000rpm离心10min，弃上清后室温风干，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性，不能再用于活性检测。

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