SV1161 CpG 甲基转移酶（M.SssI

CpG 甲基转移酶（M.SssI由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，我公司专注于工具酶产品的研发、生产和供应，为您提供的CpG 甲基转移酶（M.SssI质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括CpG 甲基转移酶（M.SssI）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：CpG 甲基转移酶（M.SssI）
英文名称：CpG methyl transferase (M.SssI)
产品货号：SV1161
产品规格：500U|500U|100U|50U

特性:
阻止限制性内切酶的切割
CpG 甲基化依赖性基因表达的研究
研究探针序列特异性与 DNA 大沟的相互作用
改变 DNA 的物理特性:
对 DNA 统一进行 [3H] 标记
减少限制性内切酶的酶切位点数目，提高限制性内切酶的特异性
概述:
CpG 甲基转移酶（M.SssI）能将双链二核苷酸识别序列 5´ ...CG...3´ 中所有胞嘧啶残基（C5）甲基化。
来源:
分离自重组的 E. coli 菌株，该菌株克隆有桑皱褶螺原体（Spiroplasma sp.）MQ1 菌株的 CpG 甲基转移酶基因。
反应条件:
1X BalbBuffer 2 + SAM
[50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]。加入 160 μM S-腺苷甲硫氨酸（SAM，随酶提供），37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
注意:
MgCl2 并不是必需的辅因子。Mg2+ 存在时，M.SssI 更倾向于分散甲基化，而不是连续甲基化，同时，会出现具有拓扑异构酶的活性。
质保声明:
CpG 甲基转移酶经过严格的质控检测，确保该产品具有zuì高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 个酶活单位定义为在 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 BstUI 限制性内切酶切割所需要的酶量。
浓度:
4,000 units/ml 和 20,000 units/ml（通过 λDNA检测）。
注意事项:
CpG 甲基转移酶（M.SssI）可以特异性地模拟高等真核生物基因组的修饰模式，因而可用于研究高等真核生物体内胞嘧啶甲基化的功能。与哺乳动物甲基转移酶不同，CpG 甲基转移酶对未甲基化和半甲基化的 DNA 底物的甲基化效率相同，因此该酶是更为有效的 DNA 修饰工具。
只要限制性内切酶的识别位点含有 CG 序列或此二核苷酸的重叠序列，CpG 甲基转移酶均能有效地阻止其发挥切割活性。需要注意:的是，CpG 甲基转移酶使 DNA 甲基化，而 E. coli 中的 Mcr 和 Mrr 的限制作用不受甲基化影响（详见 315-317 页），故应使用 Mcr-、Mrr- 的 E. coli 菌株（例如，C2925）作为转化的宿主菌。

根据您的关注的CpG 甲基转移酶（M.SssI），您可能还对以下产品有需求：



名称：尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)
货号：BTN130646
规格：500U
E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)催化尿嘧啶从含尿嘧啶的DNA上释放。UDG能有效地水解单链或双链DNA上的尿嘧啶，但不能从6碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。其反应原理图如下：


活性定义：1单位指每分钟催化60pmol尿嘧啶从含尿嘧啶的双链DNA上释放所需要的酶量。通过检测37℃条件下，30分钟从50μl含0.2μg DNA(10⁴～10⁵cpm/μg)的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。

产品应用：在37℃条件下，1单位UDG与0.1μg含尿嘧啶DNA温育10分钟后，此DNA不能再被DNA聚合酶复制。95℃加热10分钟可使该酶95%的活性丧失。由于95℃热处理后该酶仍有部分活性，建议加入尿嘧啶糖基化酶抑制剂来阻止产物DNA的降解，也可以立即用酚/lǜ仿抽提反应产物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

备注：UDG在较广的pH范围内均有活性，zuì适pH是8.0，不需要二价阳离子。活性受高离子强度(＞200mM)所抑制。

名称：T4 DNA连接酶
货号：WE0239
规格：100U|500U
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的zuì终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。

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货号	名称	规格
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