QN1061 pEGFP-N2 荧光表达载体

北京百奥莱博供应的pEGFP-N2 荧光表达载体用于科研试验，pEGFP-N2 荧光表达载体是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括pEGFP-N2 荧光表达载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pEGFP-N2 荧光表达载体
产品货号：QN1061
产品规格：20μl

pEGFP-N2 encodes a red-shifted variant of wild-type GFP (1–3) which has been optimized for brighter fluorescence and higher expression in mammalian cells. (Excitation maximum = 488 nm;emission maximum = 507 nm.) pEGFP-N2 encodes the GFPmut1 variant which contains the double-amino-acid substitution of Phe-64 to Leu and Ser-65 to Thr

载体信息：
启动子：CMV
复制子：pUCori,f1ori
终止子：SV40poly(A)
载体别名：pEGFPN2, pEGFP N2
载体分类：哺乳细胞表达载体，荧光蛋白报告载体
载体大小：4737bp
载体标签：C-EGFP
原核抗性：卡那霉素(Kanamycin)
筛选标记：新霉素(Neomycin)
克隆菌株：DH5α
表达宿主：哺乳细胞
培养条件：37℃，LB培养基
5" 测序引物：CMV-F：5"-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3"
3" 测序引物：EGFP-N：5"-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3"

储存条件：-20℃

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名称：大肠杆菌BL21化学感受态细胞
货号：BTN140428
规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本产品用作表达载体的宿主，适用于毒性蛋白的表达，适用于不是基于T7启动子的表达系统。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。
菌株基因型为：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的。

名称：大肠杆菌HB101化学感受态细胞
货号：BTN81221
规格：0.1mL*10
 HB101菌株是E.coli K12菌株与E.coli B菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20 背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。本产品是采用大肠杆菌HB101特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 具有链霉素抗性。
2.基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-)recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。

注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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