QN4097 交联琼脂糖凝胶CL-2B

交联琼脂糖凝胶CL-2B是高品质的分离试剂类产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，交联琼脂糖凝胶CL-2B是我司众多优质分离试剂类之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括交联琼脂糖凝胶CL-2B在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：交联琼脂糖凝胶CL-2B
英文名称：Sepharose CL-2B
产品货号：QN4097
产品规格：100ml|500ml

本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

琼脂糖凝胶CL-2B是在琼脂糖凝胶2B的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

理化指标：

项目	指标
基质	2%琼脂糖凝胶
排阻限	70000~40×106(球蛋白)
形状	球形
粒径	60~200μm
zuì高流速	15cm/h*
耐压	0.025 MPa
pH值稳定性	3～13(长时间)，2～14(短时间，在位清洗)
化学稳定性	可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍； 可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、 丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈

*检测条件：层析柱10mm×300mm *柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/L NaCl。

贮存：产品应密封贮存在4～25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻，保质期5年。用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
注意事项：本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。

使用过程：
1．装柱
  凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
  以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
② 选择一根一定直径的柱子，长约30～60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。
⑥ zuì好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。
2．平衡
  让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
3．上样
  上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
① 样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。
② 介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。
③ 上样体积约为柱体积的1～2%，越小分离越好。
4．洗脱
  用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5．再生
  一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
6．注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
7．在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
  清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
8．注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。
9．去热源
  用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5～6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：
① 2倍柱体积的70%乙醇；
② 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5；
③ 1倍柱体积4M尿素；
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；
  以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
10．消毒
  用0.5～1M NaOH室温下洗8～10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

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货号	名称	规格
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名称：GST标签纯化树脂
货号：QN4045
规格：5ml|10ml
pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

别名：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B
粒度：45-165µm
流速：75cm/h          
工作pH：4～10
耐压：0.3Mpa
载量：＞5mg谷胱甘肽S-转移酶
储存条件：4℃保存，有效期至少一年。

使用说明：
谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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