KFS308 端粒酶活性实时定量PCR法检测试

端粒酶活性实时定量PCR法检测试的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品仅用于生物化学研究方面，端粒酶活性实时定量PCR法检测试是我司众多优质蛋白质研究之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(人)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(人)
产品货号：KFS308
产品规格：20T

端粒是真核生物染色体末端特殊的DNA-蛋白结构，含多个重复序列（5’-TTAGGG-3’），端粒结构的形成和功能的维持需要端粒结合蛋白的直接或间接参与。端粒酶是细胞体内一种核糖核蛋白复合体，是由RNA 和蛋白质亚基组成的一种特殊的逆转录酶，其可以利用自身的RNA 模板合成末端DNA，并添加到染色体末端以克服末端序列的丢失，从而使细胞获得增殖能力。

端粒酶蛋白催化亚基（TERT 或TRT）具有反转录酶的主要特征，其表达在正常细胞中受到抑制，研究表明，TERT或TRT 的表达与端粒酶活性的表达一致，与端粒酶的活化程度密切相关。Wisman 等在人卵巢癌中利用逆转录PCR 检测hTERT 的mRNA 的表达，并采用TRAP 法检测端粒酶活性，结果证实二者均存在于恶性肿瘤中并且表达模式相同。基于上述原理，我司实时荧光定量PCR 端粒酶检测试剂盒通过检测TERT 的mRNA 表达水平来间接反应端粒酶的活性。

实时荧光定量PCR（SYBR Green Real-time PCR）方法以其的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用本试剂盒可以准确简便地进行mRNA 的表达分析。试剂盒采用SYBR Green qPCR Master Mix 为荧光实时定量PCR 和Two-Step 荧光实时定量PCR 设计的zuì优反应体系，并结合特异性的细胞端粒酶催化亚基基因TERT 引物，简化实验步骤和提高实验效率。Master Mix 含有Maxima Hot Start Taq DNA 聚合酶、dNTPS、进行优化处理的PCR 反应缓冲液以及SYBR Green 染料。使用Hot Start Taq DNA 聚合酶，为PCR 反应提供了更高的产量和灵敏度、特异性，能够检测低至10 个拷贝的目的基因。

本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对细胞基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。只需加入样品DNA 模板，反应即可进行。

备注：由于对端粒酶进行检测的所有方法都不能完全定量的检测细胞端粒酶的活性，同时TERT 基因或者蛋白的表达与端粒酶之间的间接关系准确性有待于进一步研究，望客户根据实际选择使用。

适应于大多数的Real-time PCR 扩增仪，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州博日（Line-GeneBioer）等品牌的PCR 扩增仪。

根据您的关注的端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(人)，您可能还对以下产品有需求：



名称：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)
货号：BTN81212C
规格：30次
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择zuì适合的缓冲液体系。

产品组成：

成分	规格
丙烯酰胺干粉	60g
甲叉双丙烯酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫酸铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的zuì佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以zuì佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙烯酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液zuì好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电(上阴下阳)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴上阳。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫酸铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白zuì好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前zuì好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程zuì好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。

关注端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(人)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN130871	一站式MBP标签蛋白纯化套装	2mL
SNM470	免疫组化用伊红染色液	50ml
SNM490	TBS缓冲液(20×)	500ml
SNM493	防脱载玻片(经多聚赖氨酸处理)	50片
RFT198	蛋白酶抑制剂混合物(植物蛋白提取用)	1ml|5×1ml
KFS229	TERT蛋白检测试剂盒	50T
SY0354	4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8	250ml

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