ALH351 通用型T载体克隆菌落PCR检测试

通用型T载体克隆菌落PCR检测试由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要通用型T载体克隆菌落PCR检测试等克隆与表达产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括通用型T载体克隆菌落PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：通用型T载体克隆菌落PCR检测试剂盒
英文名称：Universal T vector colony PCR identification Kit
产品货号：ALH351
产品规格：80次|400次

本试剂盒采用通用T载体引物研制的通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒，只需购买一种试剂盒，便可用于市面上所有常见的T载体(包括pGEM，pUC，pBluescript系列) 连接阳性克隆的鉴定。此外，采用T3,T7或者SP6做引物的菌落PCR鉴定试剂盒引物距离插入位点的距离非常短，因此在鉴定100bp左右或者更小片段的插入时，阴性克隆的引物二聚体条带和阳性克隆扩增条带大小接近，无法区分。往往把引物二聚体的条带看成是阳性扩增条带，造成假阳性。反之，造成假阴性。本试剂盒通用T载体引物在未插入片段时的距离至少有150bp以上，加上插入片段的长度，可以清晰的区分是插入片段扩增出的条带还是引物二聚体扩增出的条带。避免假阳性或者假阴性，大大提高了准确性。本公司研发的一管便携式PCR MasterMix预混系统，无需您一一加入各种成分，直接加入需筛选单菌落，经过1小时左右的PCR反应和电泳检测即可得到重组菌落鉴定的结果。

试剂盒组份(400次)：
2 × Taq PCR MasterMix——————5ml
Universal primer F————————250μl
Universal primer R————————250μl
ddH2O———————————————5ml

注意事项：
1. 重组菌落鉴定时，挑取单菌落前，应先做好标记，便于鉴定后使用。
2. 挑取菌落时，应选择单菌落，不要挑取太多菌体，以免影响PCR 结果。
3. 设定PCR 程序时，请根据插入片段大小决定延伸时间，如果插入片段大小为1 kb以下，延伸时间30-45 秒即可，如果片段更长，可按此比例增加延伸时间。

储存条件：-20℃。

本制品别名：T载体阳性克隆检测试剂盒

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名称：单细胞裂解液(RNA提取)
货号：BTN130804
规格：1mL
本产品为单细胞RNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定含有常用。纯化所得RNA可用于测序、单细胞PCR等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：DNA磷酸化试剂盒
货号：BTN130813
规格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。

成分	规格
10×TPK缓冲液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5′端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
PCR胶回收片段	2μL(不超过10pmol)
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
单链DNA片段	5-10 pmol
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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