BTN60901 可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂

产品简介
可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的,本品质量稳定,价位合理,需要可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂等核酸扩增(PCR)产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂
英文名称:Taq DNA Polymerase Inhibitor
产品货号:BTN60901
产品规格:0.3mL
Taq DNA聚合酶是进行PCR的zuì常用工具酶,但是由于它在常温下还是具有部分活性,所以经常会出现非特异的扩增产物,尤其是当PCR反应体系中有大量非特异DNA存在的时候。目前zuì常见的解决方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗体和使用经过化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold),但前者的缺点是加热后抗体会不可逆失活,后者的缺点是需要预热处理使酶激活。
产品特点:
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性,即常温抑制Taq酶活性,在45℃以上抑制功能丧失,当温度降低到45℃以下后,抑制活性又得以恢复。
2. 耐热,产品本身为非蛋白质试剂,远比Anti-Taq抗体稳定,便于保存和运输。
3. 使用简单,在加Taq酶前将本产品按PCR反应体积的1/10直接加入即可。
4.适用范围广,除Taq DNA聚合酶外,还可用于抑制其他DNA聚合酶的活性,如:Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一种酶的抗体一般对另一种酶的活性没有抑制作用。
5.与后续的RT-PCR兼容。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前,按PCR反应终体积1/10的比例将本产品加入到反应体系中混匀,然后再加入DNA聚合酶,启动PCR反应。
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名称:taq酶抗体
货号:BTN130815
规格:500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体,其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时,高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应zuì初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下:

储存条件:低温运输,-20℃保存、有效期一年。
活性定义:Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合,25℃,10 min温浴后,在55℃,10 min条件下抑制90%以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。
纯度:
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S,23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下,无Mouse Genomic DNA的污染。
名称:miRNA cDNA链合成试剂盒
货号:BTN130911
规格:25次
本试剂盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应,zuì终合成miRNA 对应的链cDNA。其反应流程如下:

产品特点:
1. 两步式操作,行Poly(A)加尾,再进行逆转录反应。
2. 只需要1μg的total RNA。
3. 所得cDNA可用于检测多种miRNA,不仅减少了误差、节约了样品,同时还实现了检测的高通量。
4.与miRNA荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。
5.特异性好,独特的miRNA引物及反应体系避免了Pre-miRNA的非特异扩增。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL) | 10μl |
| 10×Poly(A)聚合酶反应液 | 50μl |
| ATP溶液,1mM | 50μl |
| Oligo(dT)-Tag引物(0.5ug/μL) | 25μl |
| MMLV 逆转录(含RI) | 50μl |
| 4×RT Buffer(含dNTP) | 125μl |
| RNase-free 水 | 1ml |
储存条件:低温运输,-20℃保存。
使用方法:
一、对miRNA 3′末端进行加Poly(A)处理
1.在冰上预冷RNase-Free的反应管内加入以下试剂至总体积20μL。注意需要zuì后加入E.coli Poly(A)聚合酶。
| 试剂组份 | 体积 |
| 自备的Total RNA(见注) | 1μg |
| 10× Poly(A)聚合酶反应液 | 2μl |
| ATP溶液,1mM | 2μl |
| RNase-Free水 | 补水至20μL |
| E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL) | 0.4μL(2U) |
注:在反应中使用的Total RNA必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建议加入量为2–5μL,需根据目的miRNA的丰度决定)。
2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验(注意:只能把2μL 直接用于后续的RT反应,多于2μL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀,再将加尾后的miRNA 溶于水,然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀,带入的残留的poly(A)聚合酶反应液将会干扰RT反应),也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。
二、对带Poly(A)尾巴的miRNA进行逆转录反应
3. 按照下表设置20μL体系的RT反应:
| 成分 | 体积 |
| Poly(A)反应产物(来于上步) | 2μl |
| RNase-Free水 | 10μl |
| Oligo(dT)-Tag引物 | 1μl |
| 4×RT Buffer(含dNTP) | 5μl |
| MMLV 逆转录酶(含RI) | 2μl |
4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在42℃反应60 min。
5. 70℃保温10 min 终止反应。
6. 合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存;也可以暂时冰上放置,立即用于后续的荧光PCR 定量检测,不需要纯化。
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