WH0209 DNA末端修复/加dA尾试剂（I

DNA末端修复/加dA尾试剂（I是高品质的基因结构和功能产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要DNA末端修复/加dA尾试剂（I等基因结构和功能产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括DNA末端修复/加dA尾试剂（Illumina)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA末端修复/加dA尾试剂（Illumina)
英文名称：End Repair/dA-Tailing Reagent（Illumina)
产品货号：WH0209
产品规格：24次|96次

本制品是专门针对于illumina高通量测序平台文库构建所优化预混酶模块，能够对超声处理、化学处理、酶处理的片段化双链DNA或小片段DNA的末端进行修复，使DNA双链形成平末端，并分别在片段化DNA两端添加5"-P和3"端dA，所得产物无需纯化，直接用于Fast Ligation Reagent（WH0201-01/02）进行DNA片段的adapter连接。本试剂盒采用一步法反应流程，省去了多步纯化步骤，可对低DNA样本进行、快速末端修复及dA尾添加，操作更加简便，文库转化效率更高。

产品特点：
·单管酶促反应，一步完成双链DNA片段的末端修复、dA添加反应。
·高文库转化效率，DNA样本其实量可低至0.25ng。

产品组成：

组分	24次	96次
5×ERA Enzyme Mix	240μl	960 μl
10×ERA Buffer	120 μl	480 μl
Nuclease-Free ddH2O	1ml	4×1ml

保存条件：-25~-15℃保存，避免反复冻融，保质期为一年。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
1．操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2．请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
3．试验开始前，请清洁操作台，确保没有RNA酶和DNA酶的污染。
4．进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
5．试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。

推荐使用的其他试剂：
1.Fast Ligation Reagent（WH0201-01/02）
2.Single-Indexed Adapter （Illumina Platforms)（WH0206-01/02/03）
3.NGS Library Amplification Reagent（WH0210-01/02）

操作步骤：

准备开始实验前，了解样本DNA的浓度及Buffer成分至关重要，推荐上样量0.25ng~1μg DNA。我们推荐DNA溶解于以下溶液中：去离子水、Buffer EB或LoTE（0.1×TE）。
1．将10×ERA Buffer和5×ERA Enzyme Mix置于冰上融化，短暂混匀。
2．按下表设置PCR仪程序，热盖温度设置为70℃。

操作步骤	温度	时间
1	4℃	1min
2	20℃	30min
3	65℃	30min
4	4℃	保持温度

3．取1个的200 μl薄壁管，按下表在冰上配置反应体系。

成分	用量
10×ERA buffer	5 μl
DNA sample	X μl
Nuclease-Free ddH2O	（35-X) μl
Total	40 μl

4.向步骤3的薄壁管中加入10 μl 5×ERA Enzyme Mix，轻柔吸打6-8次混匀，注意不要涡旋。
  注：此步骤需要保持在冰浴中进行。
5.将配置好反应体系的薄壁管放入4℃预冷的PCR仪中，并开启步骤2中的程序。
6.当反应程序结束后，将薄壁管从PCR仪中取出并置冰上。
7.立即进入接头连接步骤，为保证连接效率，推荐使用Fast Ligation Reagent（WH0201-01/02）。

根据您的关注的DNA末端修复/加dA尾试剂（Illumina)，您可能还对以下产品有需求：



名称：DNA文库定量试剂盒(Ion Torrent平台)
货号：WE0233
规格：1ml|5ml
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液，试剂体系完整，操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合；使用的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的全新热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

名称：Bcl-X/L mRNA原位杂交试剂盒
货号：ZN0125
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Bcl-X/L mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗dì高辛 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗dì高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到zuì佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Bcl-X/L的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

关注DNA末端修复/加dA尾试剂（Illumina)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
ZN0018	Actin mRNA原位杂交试剂盒	100T
ZN0059	Angiopoietin-1 mRNA原位杂交试剂盒	100T
ZN0094	ASIC 1a mRNA原位杂交试剂盒	100T
ZN0231	CCR7 mRNA原位杂交试剂盒	100T
ZN0491	FAF1 mRNA原位杂交试剂盒	100T
ZN0517	FHIT mRNA原位杂交试剂盒	100T

如果您觉得“WH0209 DNA末端修复/加dA尾试剂（I”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab/sell/itemid-8540288.html
已经有1231位访客查看了本页.