WE0267 His标签蛋白纯化试剂盒

His标签蛋白纯化试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要His标签蛋白纯化试剂盒等蛋白质研究产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)
英文名称：His-Tagged Protein Purification Kit(Soluble Protein)
产品货号：WE0267
产品规格：5ml

  本试剂盒包含Ni-Agarose填料、亲和柱空柱以及可溶性His融合蛋白纯化所需的全部试剂(细菌裂解液、蛋白酶抑制剂混合物、结合缓冲液和洗脱缓冲液组分)，使用方便。该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够一步纯化带有6个组氨酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接用可溶性蛋白的纯化，使用方便，快捷。

镍柱参数：
支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径：50-160μM

试剂盒组成：

组份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	一套

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷冻；其它组分，2～8℃

注意事项：
1、在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性，本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化，如需纯化包涵体蛋白，请选择我公司的包涵体蛋白纯化试剂盒，货号为WE0266。
2、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT和EDTA。
3、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4、为提高纯化效率，先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度，Binding Buffer的范围为0-10 mM，洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5、请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。
6、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。

使用方法：

I 缓冲液的准备
可溶性蛋白纯化缓冲液配方：

组份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液(每1ml 细菌抽提试剂中已加入10μl 蛋白酶抑制剂混合物)，超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高或提取蛋白为包涵体时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(#WE0214)、 DNase I(#WE0213A)，如使用其它公司产品，请按照相应说明书操作。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致的大量产热，可分成短时间，多次超声，通过一定的间隔时间避免溶液过热。zuì终菌液变清即可。
2、10000 rpm,4℃离心3分钟，收集上清中的可溶性蛋白。
3、用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
注意：
1)本试剂盒中附带有一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度来控制流速。
4、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
5、使用适量Soluble Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
注意：洗脱峰可以分管收集，每1ml收集1管，并采用蛋白监测仪监测，收集洗脱峰。
6、洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
注意：如果是分段梯度洗脱，zuì大洗脱缓冲液中咪唑浓度未达到500 mM时，则使用浓度为500 mM的咪唑进行洗脱10倍柱体积后，再进行第6步的操作。

Ⅳ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6 M盐酸胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

储存条件：-20℃

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产品特点：
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3. 它可以与各种组织培养基兼容，在培养基中加入1/200体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

名称：一站式Tricine-SDS-PAGE套装
货号：BTN81205
规格：30次

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储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


名称：细胞线粒体纯化试剂盒
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本试剂盒用于快速便捷分离培养细胞线粒体，在分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。

使用本试剂盒分离获得的线粒体纯度较高，并且大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。因此本试剂盒分离得到的线粒体可以用于线粒体的生理功能等方面的研究。例如可以使用百奥莱博的YT148线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定分离得到的线粒体的膜电位。

本试剂盒分离得到的线粒体也可以被试剂盒中的线粒体裂解液或其它适当裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。

本试剂盒提供了线粒体制备过程中匀浆程度的重要判断指标，即台盼蓝染色，使分离得到的线粒体的质量更加有保证。台盼蓝染色液为选用试剂，在实验条件成熟后可以不必使用。

本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF，使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制，这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用的去除了大量线粒体的蛋白，在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照。如果每个样品的细胞数量为2000-5000万，本试剂盒可以处理50-100个样品。

试剂盒组份：
线粒体分离试剂———125ml
台盼蓝染色液————10ml
线粒体储存液————15ml
线粒体裂解液————15ml
PMSF(晶体)—————可配制1.5ml 100mM PMSF
PMSF(溶剂)—————1.5ml

注意事项：
1. 试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。
2. 如果不是用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。
3. 如果用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
4. 分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
5. 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g。
6. 台盼蓝与PMSF对人体有毒，请注意小心防护。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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