YT376 PCR Buffer套装

北京百奥莱博供应的PCR Buffer套装仅用于生物化学研究方面，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的PCR Buffer套装质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括PCR Buffer套装(用于PCR优化)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR Buffer套装(用于PCR优化)
英文名称：PCR Buffer Set
产品货号：YT376
产品规格：5ml

PCR Buffer套装提供了3种直接可以使用的10×PCR buffer(部分含有PCR增强试剂)，同时提供了一种未添加镁离子的也未添加PCR增强试剂的10×PCR Buffer(不含Mg2+)，便于用户调节镁离子浓度等对PCR条件进行优化，以筛选出针对于特定PCR反应的zuì佳PCR buffer。

本PCR Buffer套装可以用于各种常见的耐热DNA聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNA polymerase等的PCR反应的条件优化。

含有镁离子的PCR buffer也可以根据PCR反应条件调节的需要再添加适量镁离子。

10×PCR Buffer(含Mg2+)：100 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。
10×PCR Buffer B(含Mg2+)：含有硫酸铵和Tween 20，并含有15mM MgCl2。
10×PCR Buffer C(含Mg2+)：含有氯化钾、硫酸铵、Triton X-100和BSA等，并含有20mM MgSO4。
10×PCR Buffer(不含Mg2+)：100 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl。

产品组份：
10×PCR Buffer(with Mg2+)————1ml
10×PCR Buffer B(with Mg2+)———1ml
10×PCR Buffer C(with Mg2+)———1ml
10×PCR Buffer(without Mg2+)———1ml
MgCl2(25mM)———————————1ml

注意事项：由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

储存条件：-20℃。

根据您的关注的PCR Buffer套装(用于PCR优化)，PCR扩增缓冲液，PCR反应缓冲液，PCR优化试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：PCR抑制物清除剂
货号：BTN60804
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

名称：即用型易错PCR试剂盒
货号：BTN101005
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但zuì好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCRzuì好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。

关注PCR Buffer套装(用于PCR优化)，PCR扩增缓冲液，PCR反应缓冲液，PCR优化试剂盒的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
YT385	dATP溶液(100mM)	250μl
WE0113	BaHF高保真DNA聚合酶	500U|2500U
WE0138	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料)	100次
ALH282	PCR增强剂	1ml
ALH185	SYBR Green qPCR预混液	50μl×50次|50μl×200次
SY0037	即用型PCR预混溶液	1ml

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