MT0048 质粒小量提取试剂盒

质粒小量提取试剂盒是高品质的DNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科学研究，我公司的质粒小量提取试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括质粒小量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：质粒小量提取试剂盒
英文名称：Plasmid small quantity extraction kit
产品货号：MT0048
产品规格：100T

本试剂盒采用了一种的离子交换柱，在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。该质粒提取试剂盒采用改进的质粒抽提系统，彻底解决了RNA污染的问题。的离子交换柱具有高达40μg的结合能力，每个纯化柱可用于抽提1-5ml LB培养过夜的大肠杆菌菌液，抽提所得的质粒的OD值一般在1.80左右。 由本试剂盒抽提所得的质粒可直接用于转化、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切等。

产品组成：

组分	规格
Buffer A(重悬液)	25ml
Buffer B(裂解液)	25ml
Buffer C(结合液)	30ml
Washing Buffer(洗涤液)	20ml
Elution Buffer(洗脱液)	10ml
RNaseA(20mg/ml)	0.5ml
吸附柱及套管	100套

保存条件：室温避光保存，有效期2年。(RNase A置于-20℃保存)

操作方法：

1．取过夜培养的菌液 1.8ml 加入到 2ml EP管中，13000rpm 室温离心1分钟 后收集细菌沉淀。倒掉上清液，可再次加入菌液 1.8ml，离心后去除上清液。
2．每管加入250μl Buffer A（确认已经加入RNase A），用吸头吹打沉淀菌体至无可见细菌团块，以确保沉淀完全散开。
3．每管加入250μl Buffer B，轻轻颠倒离心管 4～6 次，室温放置 2 分钟，使细菌完全裂解，溶液应变的透明。切勿剧烈振荡，否则会导致基因组DNA 断裂，从而导致所得质粒被基因组DNA 污染。
4．每管加入350μl Buffer C，随即颠倒离心管 4～6 次混匀(切勿剧烈振荡)，可见白色絮状物产生，室温静置 1分钟。
5．手腕用力上下振荡 4～6 次，使白色絮状物振散，然后置于离心机上 13000rpm 室温离心10分钟。
6．将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内，13000rpm离心30s，倒弃收集管内液体。(切勿吸入白色沉淀，否则会堵塞离心柱)。
7．在质粒纯化柱内加入500μl Washing Buffer(务必确认已加入无水乙醇)，13000rpm 室温离心30s，洗去杂质，倒弃收集管内液体。
8．重复步骤7 一次。
9．将吸附柱重新放入套管中，13000rpm 室温空离心2分钟。
10．将质粒纯化柱置于新的1.5ml离心管上，静置 2分钟，使痕量乙醇完全挥发，加入80-120μl Elution Buffer 至管内柱面上，放置 1分钟。Elution Buffer 使用前zuì好 50℃ 水浴预热。
11．13000rpm 室温离心2分钟，所得液体即为高纯度质粒。

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货号	名称	规格
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名称：DNA产物快速纯化试剂盒
货号：WE0170
规格：50次|200次
  本试剂盒采用硅基质膜技术和试剂配方，通过离心吸附柱快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从PCR产物或酶反应液(酶切，连接，探针标记等)中纯化回收100 bp-10 kb的DNA片段，每个吸附柱zuì高可吸附10μg的DNA，同时zuì大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer PB	30ml	120ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(浓缩)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
离心吸附柱DM及收集管	50套	200套

产品特点
1、快速简单：操作步骤少，15分钟完成，同时可处理多个样品，节省时间。
2、回收率高：硅基质膜技术和试剂配方保证每次zuì大量回收到纯度高的目的DNA。
3、处理量大：每个离心吸附柱每次zuì多可吸附的DNA 量为10μg。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2- 8℃。当溶液低温保存时,使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
2、本试剂盒可无选择性回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒(WE0168)
3、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer PB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、回收效率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
6、所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤：
1、估计DNA反应液的体积，加入5倍体积的 Buffer PB，充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油)。
注意：
1)如DNA反应体系为50μl(不包括石蜡油体积)，则加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后检测溶液的pH值，若pH值＞7.5，可向其中加入10-30μl的3 M醋酸钠(pH5.0)，从而将pH值调到5-7。
2、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3、将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置1分钟，13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为750μl，若样品体积大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序)，建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。
5、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
6、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加30-50μl Buffer EB，室温放置1分钟。13000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
2)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
3)洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
4)回收＞10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

储存条件：室温(15～30℃)。

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