WH0018 广谱基因组DNA提取试剂盒（离心

广谱基因组DNA提取试剂盒（离心由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要广谱基因组DNA提取试剂盒（离心等DNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood/cell/tissue
产品货号：WH0018
产品规格：50次|200次

本试剂盒适用于小体系全血（≤1ml）、培养细胞和动物组织等基因组DNA的广谱性提取试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系，使蛋白变性，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理，快速纯化得到基因组DNA。使用本试剂盒纯化所得的DNA无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和Southern杂交等实验操作。

产品特点：
·简单快速：1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·广泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。
·超纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

材料用量和纯化核酸得率：

样本	处理量	DNA得率（μg)
哺乳动物全血	100～500μl	3～10
禽类、两栖类全血	5μl	5～10
培养细胞	106～10７Cells	5～30
动物组织	30mg	10～30
小鼠尾	1.2cm（尖部)	10～25
大鼠尾	0.6cm（尖部)	20～40

组织匀浆以及裂解充分图例：

组织取样量图例：


试剂盒组成：

组分	50T	200T
缓冲液GA	15ml	50 ml
缓冲液GB	15ml	52 ml
缓冲液GD	13 ml	50 ml
漂洗液PW	15ml	50 ml
洗脱缓冲液TE	15ml	60 ml
Proteinase K	1 ml	4×1 ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2 ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配试剂：红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer目录号：WH0229)；RNase A（100mg/ml）（目录号：WH0217）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料
  a．如提取材料为血液，可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200μl可加缓冲液GA补足；
  注意：如需处理更大体积血液，如300 μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm（~11500×g)离心1 min（若离心机zuì高转速不允许，可3000 rpm（~3400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
  红细胞裂解液本公司另外有售（目录号：WH0229），可根据需要来决定购买。
  b．如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。
  c．贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm（~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；
  d．动物组织（脾组织用量应少10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10,000rpm（~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
  注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNaseA（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
  a．提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
  b．提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
  c．提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
  注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
3．加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4．加人200μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
6．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．重复操作步骤7。
9．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。

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名称：红细胞裂解液A型(核酸纯化)
货号：BTN60403
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.快速，一次处理只需要2-3分钟。处理后提取血液DNA可以不需要酚/lǜ仿去蛋白质。
2.，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，一般样品zuì多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以与市场上大多数血液DNA提取试剂盒结合使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在装有抗凝血液的离心管中，按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000 g室温离心2分钟，小心吸弃弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于1/2 体积的红细胞裂解液A型中，轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4.沉淀即为去除了红细胞的血液细胞，可以直接用于后续的实验。

名称：痰液DNA提取试剂盒
货号：BTN111201
规格：50次
痰液是重要的检测样品，可以用于诊断肺癌，肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯化DNA十分棘手，为此本公司开发了本产品，专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化DNA，用于后续的分子生物学分析。

产品特点：
1. 每次可以处理10-20mL痰液，得到2-5μg DNA。
2. 纯度高,可直接用于后续得PCR检测。
3.一管式操作，减少污染，节约成本。
4.含痰液保存液(溶液A)，便于取样和运输。
5. 环保，不需要使用苯酚和lǜ仿等有毒的有机溶液。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A(痰液细胞固定液)	500ml
溶液B(痰液解稠剂)	500ml
溶液C	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
一：痰标本的获取与保存(注意：痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌，需按传染源相关规定流程进行操作)
1. 每例患者在常规痰标本采样时，zuì好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个50mL的痰液收集管内新鲜加入10mL溶液A和10mL溶液B，待患者晨起漱口后，咳深部痰7～8口(约10-20mL)，收集到装有溶液A和溶液B混合液的痰液管收集内，混匀后储于4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室，4℃冰箱保存直到使用。
2. 使用时，在室温反复振摇装有样品(总体积约30-40mL)的痰液收集管5～10分钟，充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。
3. 4℃2500g离心5分钟，弃上清。
4.沉淀再用自备的PBS液洗两遍。
5. 所得沉淀可以直接用于涂片，用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在0.2mL PBS缓冲液中重悬后转入1.5mL螺旋盖塑料离心管，-20℃冰箱长期保存，或立即用于下步的DNA提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境，建议不要使用压盖式塑料离心管。同时zuì好设置一个阳性和一个阴性对照。
二：DNA提取
6.在上步所得的0.2mL样品中加入0.6mL溶液C。溶液C容易形成沉淀，用前需37℃加热融化并摇晃均匀。
7.室温放置10分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
8. 振荡数秒后加入0.7mL自备的异丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀。
9. 把离心管的向心面对向转头，13,000-15000g室温离心至少15分钟。
10.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀(此时可能看不见)。
11. 加入1.0mL 70%乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
12.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
13. 将离心管放回离心机再短暂离心数秒，然后用移液器移弃约50μL残留液体(70%乙醇)，否则它会影响后续反应。
14. 加入200μl RNase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA沉淀，溶液将呈混浊状，含少量不溶，短暂离心后存上清(含DNA)。
15. 直接取适量用于PCR，样品使用量不超过PCR体系的1/2。剩余DNA样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

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