WH0106 Real-Time PCR快速反

Real-Time PCR快速反由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的Real-Time PCR快速反质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括Real-Time PCR快速反应液（探针法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Real-Time PCR快速反应液（探针法)
英文名称：QuickFire qPCR PreMix（Probe)
产品货号：WH0106
产品规格：125次|500次

本制品是利用序列特异性探针，对DNA进行快速、灵敏的Real-Time PCR定量检测的专用试剂。优化的预混液可使反应时间缩短60%以上，适用于标准或快速PCR仪。QuickFire qPCR PreMix采用了抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶，配合独特的快速PCR Buffer体系可确保在所有的Real-Time PCR仪上进行灵敏的qPCR反应，具有反应快速、PCR反应时间缩短60%，同时具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点，使你更快获得高准确性结果，并节约科研时间和能源。广泛地适用于在ABI、Stratagene、Roche、Bio-Rad和Eppendorf等各种荧光定量PCR仪上采用Probe法进行基因表达分析和核酸检测等实验。

产品特点：
·zuì快速：QuickFire系列的探针法产品，采用了可快速激活的抗体修饰Anti Taq DNA聚合酶，配合独特的快速Buffer体系，可节省多达60%的反应时间，成为目前市面上zuì快速的Probe试剂。
·扩增能力强：扩增荧光信号强，结果更准确可信。
·稳定性好：Buffer中添加独特的PCR稳定剂和增强剂，使结果更稳定，重复性好，更准确可信。
·仪器广泛适用：不仅适用于快速荧光定量PCR仪，也适用于普通荧光定量PCR仪。
· ROX校正：单独包装的ROX染料，使用更灵活，结果更准确。

根据您的关注的Real-Time PCR快速反应液（探针法)，荧光定量PCR预混反应液，qPCR试剂盒，您可能还对以下产品有需求：

货号	名称	规格
BTN70902	5M甜菜碱溶液，PCR级	1.5mL
BTN131227	10nt随机引物(0.5μg/uL)	250
YT372	Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)	200U|1000U
YT376	PCR Buffer套装(用于PCR优化)	5ml
YT388	dTTP溶液(100mM)	250μl
WE0107	Pfu DNA Polymerase	500U

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名称：Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)
货号：YT372
规格：200U|1000U
pfu DNA 聚合酶简称Pfu酶，是zuì常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量为90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶没有反转录酶活性。

由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为2.6×10e-6。Pfu的出错率不仅远远低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作为选的高的高保真DNA聚合酶。

来源：本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆等。
1）Pfu酶扩增出来的DNA片断为双平端，可以用于双平端克隆，但不能用于常规的T载体克隆。
2）dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

10×Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl,1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚氯fǎng抽提可以使Pfu酶失活。

储存条件：-20℃。

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）Pfu DNA polymerase在扩增DNA片断时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况，可以选择YTTaq DNA polymerase。在扩增2kb以下DNA片断时，Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu酶。
3）Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要zuì后加入，并且要在冰浴上操作。
4）不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。

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