WE0204 磁珠法游离DNA提取试剂盒

北京百奥莱博供应的磁珠法游离DNA提取试剂盒仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多磁珠法游离DNA提取试剂盒等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括磁珠法游离DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磁珠法游离DNA提取试剂盒
英文名称：MagDNA Free-Circulating DNA Extraction Kit
产品货号：WE0204
产品规格：96次

  本试剂盒适用于从血浆、血清、羊水、淋巴液、尿液等无细胞体液中简单、的纯化回收游离DNA(Free circulating/Cell-free DNA)。在高盐存在时，游离DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的游离DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR以及二代测序建库等下游实验。该试剂盒还可用于病毒DNA的提取。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer KCL	96ml
Buffer KCW1(浓缩液)	72ml
Buffer KCW2(浓缩液)	60ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	4ml

自备试剂：异丙醇、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶* 粉末中加入用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取率低。
3、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer KCW1和Buffer KCW2中加入无水乙醇并做好标记。
4、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
5、Magbeads在使用前一定要涡旋震荡20秒使其充分混匀。

操作步骤：
次使用前请检查Buffer KCW1和Buffer KCW2中是否已加入无水乙醇。
1、向1.5ml的离心管中加入20 ul 蛋白酶K ，之后加入300 ul血浆。
2、向上一步的离心管中加入300 ul Buffer KCL，涡旋震荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟。
3、将上一步的离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。
4、向上一步的离心管中加入150 ul异丙醇，涡旋震荡混匀后短暂离心。之后向离心管中加入40 ul彻底混匀的Magbeads，涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡10分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)或连续颠倒混匀10分钟。
注意：如果样品量较多，可将异丙醇与Magbeads提前按比例混匀，之后同时加入裂解产物中。
5、将上一步的离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)，期间避免接触Magbeads。
6、将离心管从磁力架上取下，加入500 ul Buffer KCL后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后弃去溶液。
注意：如果样品为血清、羊水、淋巴液或尿液，Buffer KCL漂洗步骤可去除。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW1后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
8、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW2后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管壁上有液珠，可向离心管中加入800 ul无水乙醇。盖盖后颠倒离心管，之后彻底去除无水乙醇。
11、将离心管从磁力架上取下，加入30-100 ul Buffer EB或去离子水。涡旋震荡时Magbeads完全悬浮于洗脱液中后将其放入56℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
12、将上一步的离心管放置于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)

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名称：非冻型组织DNA保存液
货号：BTN3660
规格：250mL
本品是我公司推出的在室温条件下长期保存DNA样品的保存液。它能迅速渗入细胞内，通过抑制DNase的活性而长期保证DNA的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可室温保存动植物组织长达两年，保护DNA不被降解。
2. 安全可靠，本产品无害，从DNA保存液保存的样品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物学实验。
3. 使用简单，直接把新鲜的动植物样品浸在DNA保存液中即可。
4.可广泛用于各种动植物标本的野外采集。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

步：准备工作
1.估计完全浸没样品所需要Tissue DNA保存液的体积。
注：1g 组织约需10mL Tissue DNA保存液。
2.标记收集管并加入估计所需量的Tissue DNA保存液。

第二步：样品的处理
1.以zuì快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注：鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
2.将组织碎块完全浸没于收集管的Tissue DNA保存液中。

第三步：样品的存放
将收集管存放于温度适当的地方，保存温度不要低于4℃。

第四步：样品的使用
1.从存放处取出样品，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
2.立即开始DNA提取。

名称：柱式动物DNA提取试剂盒
货号：BTN71206
规格：50次
本试剂盒是在我司动物DNA提取试剂盒的基础上改良而得的柱式升级产品，主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。

产品特点：
1. DNA更加纯净，大多数DNA样品的OD260/280值在1.8-1.9之间。
2. DNA产率一般在200μg/g左右(跟组织种类密切相关)。
3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
4. 操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约10分钟，适合大规模样品处理。
5. 安全，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。
6. 高，质量和国外同类产品相当，但价格更。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	20ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存、有效期一年。

使用方法：
注意：溶液A容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。

1. 根据使用材料的不同进行下列操作：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入0.8mL预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入0.8mL预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞，0.8mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜或冷冻的组织：先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A，用剪切式匀浆器匀浆30秒左右，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg。
d)对DNAhold保存组织：先用纸吸去DNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。
2. 加入0.4mL预热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠，可将1mL枪头剪掉一截再用，也可以用称量方法加0.4 g。加入溶液B后需要颠倒数次充分混匀。
3. 65℃水浴5-10分钟。如果室温放置，DNA产量将降低10-20%。
4. 加入0.2mL自备氯fǎng，振荡器上充分振荡混均30秒，此时溶液将呈乳白色。一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5. 12000～15000g室温离心2分钟。上清透明，中间层为白膜(蛋白层)。
6.小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。
7. 每个管中加入1.5倍体积的溶液C，充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
9. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
11. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0，室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

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