MT0018 5×Real-Time qPCR

5×Real-Time qPCR由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多5×Real-Time qPCR等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括5×Real-Time qPCR MasterMix(TaqMan探针法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：5×Real-Time qPCR MasterMix(TaqMan探针法)
英文名称：5×TaqMan qPCR MasterMix
产品货号：MT0018
产品规格：20μl×100次|20μl×500次

本品是采用TaqMan 探针法进行 Real-Time PCR的专用试剂，适合于 FAM/HEX/TET/JOE 等双标记探针（本品也适用于 Molecular Beacon 探针），其中 2×Hi TaqMan qPCR Mix 将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、模板、水即可。

本品中的DNA聚合酶为化学法修饰的Hot Start Taq DNA 聚合酶，该酶在50℃以下无活性，只有95度条件下加热15分钟后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增，大的提高了PCR扩增特异性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

本品配有单独的ROX内参染料，使得该试剂可应用于所有 RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR（Applied Biosystems)；Mx3000P（Stratagene)；LightCycler（Roche Diagnostics)； Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-TimePCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。


图：应用本品进行TaqMan探针法检测 10～107 copy模板的扩增曲线和标准曲线。

特点：
1．热启动酶采用化学修饰，热启动；
2．单组份预混液，使用方便快捷；
3．高特异性，有效抑制非特异性扩增；
4．高灵敏度，可检测低丰度基因；
5．适用于所有实时定量PCR仪器。

产品组成：

包装	5×TaqMan qPCR Mix	50×ROX Reference Dye
100T×20μl	400μl	200μl
500T×20μl	1ml×2	200μl

储存：长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存3年。

使用方法：

1．根据PCR仪选择步骤A或B

A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR（Applied Biosystems)；Mx3000P（Stratagene)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

加入物	加入量	终浓度
5×TaqMan qPCR Mix	4μl	1×
50×ROX Reference Dye	0.4μl	1×
PCR Forward Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
TaqMan Probe（10μM)	0.4μl	0.2μM
DNA 模板	0.5~2μl
ddH2O	Up to 20μl

B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler（Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

加入物	加入量	终浓度
5×TaqMan qPCR Mix	4μl	1×
PCR Forward Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
TaqMan Probe（10μM)	0.4μl	0.2μM
DNA 模板	0.5~2μl
ddH2O	Up to 20μl

2．进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：

Stage 1:	95℃	15分钟*
Stage 2:	95℃	10s
	60℃	60s	35～40 cycles

注意：由于该酶为化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶，必须于95℃加热 15分钟 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短或延长。

3．反应结束后确认 Real-Time PCR的扩增曲线和标准曲线。

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BTN100409 6nt随机引物(0.5 ug/uL) 5μg
YT374 DNA聚合酶(高保真)(率)(双平端克隆) 200U|1000U
YT401 核酸酶/DNA清除剂(喷雾清除剂) 250ml
WE0100 PCR Mix(含染料)(滴瓶装) 5ml
ALH207 植物直接PCR试剂盒(无需提取DNA) 100次|500次
ALH197 一步法荧光定量耐热RT-PCR试剂盒 50μl×50次|50μl×100次
SY0037 即用型PCR预混溶液 1ml

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名称：miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒
货号：BTN131042
规格：25次
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。

产品特点：
1. 简便、快捷完成miRNA的检测。
2. 检测通量高，只需zuì少的RNA样本，即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3. 检测特异性好，独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4. 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。

试剂盒组成：

成分	规格
2×miRNA qPCR Mix	0.75ml
Reverse Primer(10μm)	30μl
RNase-Free Water	1ml
miRNA cDNA链合成试剂盒	25T
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、miRNA cDNA链合成
请参见miRNA cDNA 链合成试剂盒产品使用说明书。

二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系：

试剂组份	体积
2×miRNA qPCR Mix	25μl
Forward Primer(自备)	1μl
Reverse Primer	1μl
miRNA 链cDNA	xμl
RNase-Free Water	至50μl

4. 建议反应程序设置如下：

循环	温度	时间
1×	95℃	10min
40～45×	95℃	15s
	60℃	1min
溶解曲线分析	根据PCR仪要求设定

注意事项：
1. miRNA 链cDNA的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

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