WE0108 2×Pfu MasterMix

2×Pfu MasterMix由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于生化实验研究等领域，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的2×Pfu MasterMix质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括2×Pfu MasterMix(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Pfu MasterMix(含染料)
英文名称：2×Pfu MasterMix(With Dye)
产品货号：WE0108
产品规格：5ml

  本品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力，是目前发现的错配率zuì低的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可zuì大限度地减少人为误差和污染。的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Pfu MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Pfu MasterMix含有Pfu DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Pfu MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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名称：硫酸镁溶液(PCR级MgSO4溶液)
货号：BTN130840
规格：5mL
本产品为专门用于PCR的MgSO4溶液，浓度10mM，可以用于调节MgSO4的zuì佳浓度。MgSO4为常用的PCR增强剂之一。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：即用型热启动PCR试剂盒
货号：BTN130986
规格：1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR 试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

试剂		加入量
Hotstart PCR Mix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10pmol each
补水到		30μL

放入PCR 仪中，根据用户确定的参数进行PCR，扩增结束后取5-10μL上样电泳。
注：用户可按照每1.5mL Hotstart PCR Mix中加入60μl 专用染料的比例将60μl 专用染料加入到1.5mL PCR MagicMix 3.0中，本染料对PCR扩增效率没有任何影响。扩增结束后，可直接取PCR反应液上样电泳，不需要额外再加DNA上样液。

注意事项：
1．如果反应体系不是30μl，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA 模板中有PCR 不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR 体系中加入1/10的PCR 抑制物清除剂(BTN60804，30μl 体系中加3μl)，可能会对PCR 有帮助。

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