YT159 Ad-GFP-LC3B

Ad-GFP-LC3B由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，我公司专注于细胞凋亡与增殖产品的研发、生产和供应，为您提供的Ad-GFP-LC3B质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括Ad-GFP-LC3B在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Ad-GFP-LC3B
英文名称：Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
产品货号：YT159
产品规格：1ml|10×1ml

本品是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。

LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3zuì初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究zuì为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路zuì为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶， 以ATG3为E2样连接酶，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来。

自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下， 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。

Ad-GFP-LC3B是百奥莱博的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。

腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。

百奥莱博的Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。

本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。

本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染10个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染50个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。

注意事项：
1. 反复冻融会降低病毒滴度，如有必要请在收到本产品后分装保存。病毒融解后，如果在一周内使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年，可能会导致滴度下降，此时建议重新测定病毒滴度。
2. 腺病毒感染需要细胞表面的CAR受体，请确认拟使用的细胞或组织可以被腺病毒感染。
3. 本产品使用前请仔细阅读附录1《腺病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1)，没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病，可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作。

储存条件：-20℃，有效期1～2个月。

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名称：细胞凋亡DNA断裂片段提取试剂盒
货号：YT120
规格：50次
本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提zuì小片段为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。

试剂盒组份：
样品裂解液———30ml
蛋白酶K————130μl
10M 醋酸铵——6ml
TE——————6ml

注意事项：需自备Tris平衡苯酚、lǜ仿和无水乙醇。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：细胞凋亡与坏死检测试剂盒
货号：YT130
规格：100次
本试剂盒提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡与细胞坏死检测方法。染色快速方便，两种染料的染色仅需20-30分钟，一步染色即可完成。使用方便，使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

试剂盒组份：
细胞染色缓冲液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml

本试剂盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)双染的方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。
Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。参考下图，左图为诱导凋亡前的正常细胞，右图为诱导凋亡后的细胞。



注意事项：
1. 需使用流式细胞仪进行红色和蓝色双荧光检测。也可使用荧光显微镜检测。
2. 染色后宜尽快检测。
3. Hoechst 33342对人体有害，碘化丙啶(PI)对人体有刺激性，请注意适当防护。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

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SNM507 CCK-8细胞活力检测试剂盒(微板比色法) 1000T|500T|100T
SNM513 Caspase-3活性检测试剂盒(分光光度法) 100T|50T|20T

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