SY0500 Hoechst 33342/PI

Hoechst 33342/PI由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，我公司专注于细胞凋亡与增殖产品的研发、生产和供应，为您提供的Hoechst 33342/PI质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括Hoechst 33342/PI双染试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Hoechst 33342/PI双染试剂盒
英文名称：Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
产品货号：SY0500
产品规格：100T

Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。

经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。

本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。

注意事项
1) Hoechst 33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
2) Hoechst 33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
3) 荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
4) Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5) 如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，有效期12个月

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名称：细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)
货号：YT121
规格：50次
本试剂盒是目前zuì的DNA Ladder抽提试剂盒之一。本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提zuì小片段为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到zuì大50kb左右的基因组DNA。本试剂盒可以抽提50个样品。

DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。

样品先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，zuì后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚lǜ仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。

通过DNA纯化柱方式抽提DNA ladder比用传统的酚lǜ仿抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易损失。试剂盒提供了RNase A，可以获得不含RNA的高纯度总DNA，排除了RNA对DNA ladder观察造成的干扰。

本试剂盒每次zuì多可以抽提20mg组织或200-350万个培养细胞。样品用量过多，反而会影响抽提效果。纯化柱对于DNA的zuì大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA。样品的用量请勿超过纯化柱的容量，样品用量zuì好能保持在纯化柱容量的70%或以下。当然过少的样品也不利于检测到DNA ladder。

对于培养细胞的凋亡检测，通常6孔板一个孔的细胞就足够用于DNA ladder的抽提和检测。

试剂盒组份：
样品裂解液A——————10ml
样品裂解液B——————11ml
洗涤液I——————21ml(次使用前加入7ml无水乙醇)
洗涤液II——————16ml (次使用前加入24ml无水乙醇)
洗脱液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNase A——————220μl
DNA纯化柱及废液收集管——————50套

注意事项：
1. 温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。
2. 次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
3. 本试剂盒需使用55℃或70℃水浴，请提前作好准备。
4. 除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。
5. 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
6. 废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

储存条件：室温，有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存)

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