BTN130904 超级杂交液(Oligo探针)

超级杂交液(Oligo探针)由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多超级杂交液(Oligo探针)等探针标记及检测产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括超级杂交液(Oligo探针)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超级杂交液(Oligo探针)
英文名称：Super hybrid solution(Oligo probe)
产品货号：BTN130904
产品规格：10mL

本产品为即用型Oligo探针专用核酸杂交液。核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交，由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一，应用非常广泛。

产品特点：
1. 既可以用于DNA Oligo探针，也可以用于RNA Oligo探针。
2. 即开即用，使用方便。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对 Oligo探针的杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。
2. 对 Oligo探针的杂交，zuì佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以zuì佳温度需要适度摸索和优化。
3. 确定洗膜温度: Oligo探针可以室温洗膜。
4. 预杂交步骤
预杂交就是用不含Oligo探针的本产品跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附Oligo探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附Oligo探针，造成高背景。
1)将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2)将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋zuì好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL本产品的比例沿小口加入本产品，然后用塑料封口机将口封牢。
3)将此塑料袋浸没入温度设定在zuì佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使本产品与印迹膜充分接触。
5. 杂交步骤
1)将Oligo探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入Oligo探针后用热封机封口)。Oligo探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，Oligo探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则Oligo探针的量可减少。如果是放射性Oligo探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
2)在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。
6. 洗膜步骤
注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。
此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的Oligo探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1)杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含Oligo探针的杂交液。此含Oligo探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2)剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3)重复上步操作一次。
4)将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5)重复上步操作一次。
6)将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

疑难解答：
问题一：高背景(有或没有杂交信号)
解决方案：将放射性Oligo探针的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；将非放射性Oligo探针的终浓度降低到30 ng/mL以下；减少杂交时间；适当提高杂交温度。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应该连续振荡，不应该有气泡，避免印迹膜变干。将放射性Oligo探针活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性标记Oligo探针的终浓度；适当降低杂交温度。

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本品为iFluor 555标记的鬼笔环肽，可发出橘红色的荧光，具有的高亮度和光稳定性，且染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluor 555 鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、纳米晶体和其他iFluor偶联物（包含iFluor偶联二抗）。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供。

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

分子量：～1300
zuì大激发/发射波长：556/574nm
溶解性：溶于DMSO
储存条件：-20℃避光干燥，有效期一年
结构式


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