YT466 C端EGFP标签融合蛋白质粒

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特别提示：包括C端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：C端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)
英文名称：C-EGFP plasmid（with CMV promoter）
产品货号：YT466
产品规格：1μg

本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含EGFP(Enhanced GreenFluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Multiple cloning site	651-740
EGFP	741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site	1510-1531
SV40 polyAsignal	1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication	2064-2370
bla promoter	2395-2519
SV40 promoter	2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3704-4162
pUC origin	4291-4958

本质粒(5010bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。

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货号	名称	规格
BTN160101	pression/BTN160101.html" target="_blank">pUCm-T载体	1μg
BTN90504	pression/BTN90504.html" target="_blank">大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞	0.1mL*10
BTN80910	pression/BTN80910.html" target="_blank">X-gal溶液	10mL
BTN60210	pression/BTN60210.html" target="_blank">硫酸链霉素溶液	10mL
ALH355	pression/ALH355.html" target="_blank">一管式定点突变试剂盒	10次|20次
ALH359	pression/ALH359.html" target="_blank">一步法定向表达试剂盒	20次
RFT165	pression/RFT165.html" target="_blank">BL21(DE3)化学感受态细胞	20×100μl

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名称：即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子，无MCS)
货号：BTN120515
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 来源于pUC19 ，无RNA聚合酶启动子，插入位点两侧无多克隆位点。
4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
5. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
6.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体E型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱


名称：大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN121004
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。本感受态细胞适用于真核蛋白表达，具有氯霉素抗性。

菌株基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)pRARE(argU，argW,ileX，glyT，leuW，proL)(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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