ALH343 T载体连接试剂盒

T载体连接试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，本制品用于科研试验，T载体连接试剂盒是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括T载体连接试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T载体连接试剂盒
英文名称：T vector ligation Kit
产品货号：ALH343
产品规格：20次|60次

本试剂盒载体来源于pBluescript II SK(+) 质粒，在EcoRI酶切位点处添加了适当序列，经XCM I 酶切后其3’末端直接产生未配对的T碱基而成，因此有更高的重组效率。本载体插入位点两端独特设计的两个ECOR I位点使插入片段可以用廉价的ECOR I单酶切检测； 同时本载体不含NdeI或NcoI限制性内切酶位点，可方便用于克隆含上述酶切位点的基因。此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。说明书末列出了载体相关的技术资料，其全序列可参照pBluescript II SK(+)序列，只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。

试剂盒组份：
T Vector(30ng/μl)——————————20μl
1000bp Control（30ng/μl）-——————5μl
10 × PEG Enhancer-——————————50μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
10×Ligation Buffer——————————40μl
T4 DNA ligase（5Uμl）—————————20μl

储存条件：-20℃。

本制品别名：T克隆试剂盒

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名称：大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
货号：BTN140576
规格：0.1mL*10
 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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