XH004 血液线粒体提取试剂盒

血液线粒体提取试剂盒是高品质的亚细胞结构研究产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，我公司专注于亚细胞结构研究产品的研发、生产和供应，为您提供的血液线粒体提取试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括血液线粒体提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血液线粒体提取试剂盒
英文名称：Blood Mitochondrion Extraction Kit
产品货号：XH004
产品规格：50T|100T

本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

试剂盒组成：

组份	50T	100T
红细胞裂解液（10X）	100mL	100mL×2
白细胞裂解液	50mL	100mL
线粒体清洗液	25mL	50mL
线粒体保存液	5mL	10mL

保存条件：4℃可保存3个月，长期保存可置-20℃。

操作步骤：
1．血液处理：
  血液要求：非肝素钠抗凝血，zuì好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以线粒体得率会大大减少，并且完整性也会降低。
a．对于无核红细胞全血（如哺乳动物处周血），取血约5ml（适当分成几管），加入3倍体积的红细胞裂解液（稀释后的工作液,下同），混匀，800×g 5min离心收集白细胞。加入1-2ml红细胞裂解液（稀释后的工作液），吹打重悬白细胞，合并于一管中，800×g 5～10min离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色，可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。
b．对于有核红细胞全血（如禽类全血），取约200-300μl全血，800×g 5～10min离心收集全细胞，用生理盐水或者PBS清洗两次，留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。
2．在收集到的细胞中，加入1.0mL冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨20~40次；
3．匀浆物转移到离心管，4℃，1000×g离心5min；
4．取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000×g再次离心5min（一共两次离心，完整去核）。
5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；
6．在线粒体沉淀中加入0.5 mL线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min(再次去核）；
7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
8．用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：是全程低温操作。第二是快速。第三，如有条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；[rpm]²即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。

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名称：动物线粒体提取试剂盒
货号：HR0233
规格：50T|100T
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行zuì终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。
对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的，本试剂盒用简便快速的方法即可在40分钟内提取得到线粒体。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的线粒体提取。不能用于冷冻样品的线粒体提取。

储存条件：2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● zuì好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。
细胞线粒体提取：
1．取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2．用冷 PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．用 Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
8.在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
9．弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
10．即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织线粒体提取：
1．取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2．用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。
3．加入 400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．用 Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
8.在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
9．弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
10．即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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