WH0124 血液/组织/细胞总RNA提取试剂

北京百奥莱博供应的血液/组织/细胞总RNA提取试剂用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多血液/组织/细胞总RNA提取试剂等RNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：Magnetic Blood/Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit
产品货号：WH0124
产品规格：50次

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从各种组织、细胞、血液中分离纯化高质量总RNA。本产品可与Kingfi sher Flex96自动核酸提取仪契合，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，从而实现磁珠和核酸的转移，提高了自动化程度。整个实验过程安全、便捷，提取的总RNA纯度高，没有基因组、蛋白和其它杂质的污染。如果需要高通量自动化提取，我公司可以提供整合方案。

使用本试剂盒纯化的RNA适用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点：
·本试剂盒即可满足手工提取也可适用于多种高通量平台批量提取。
·本试剂盒所得产物满足下游各类检测实验以及NGS分析。

试剂盒组成：

组分	规格
裂解液RL	30ml
去蛋白液RD	48ml
漂洗液RW	2×12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
磁珠悬浮液W	2×1ml

储存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。该试剂盒中磁珠悬浮液W初次使用后建议置于2-8℃保存12个月。加入β-巯基乙醇的裂解液RL 4℃可放置1个月。

自备试剂：β-巯基乙醇、异丙醇、无水乙醇

选配试剂：DNase I （目录号：WH0051)；10×红细胞裂解液H （目录号：WH0229)；RNase-Free过滤柱CS （目录号：WH9007)

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．操作前在裂解液RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1ml裂解液RL中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液zuì好现用现配，配好的裂解液RL 4℃可放置1个月，裂解液RL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2.次使用前应在去蛋白液RD与漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

操作步骤：

一、组织/细胞总RNA提取
1．样本处理
①组织样本匀浆：
  注意：组织量不要超过20mg，否则可能导致RNA得率和质量下降。对于富含DNA的样本，如脾脏，建议使用5 mg。
  取新鲜或-80℃冻存的组织，液氮充分研磨成粉末状，称取5-20mg至装有450 μl裂解液RL（使用前检查是否加入β-巯基乙醇)的1.5 ml离心管（或者取适量组织加入裂解液后，电动匀浆)，立即涡旋混匀，室温静置5min，12000rpm离心5min，小心吸取上清。
②细胞样本处理：
  a.悬浮细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×10⁷)：估计细胞数量，300×g离心5min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。
  b.胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS溶液洗涤细胞，吸除PBS溶液，向细胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的PBS溶液处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
  注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，影响RNA与磁珠的结合，造成RNA的产量降低。

裂解细胞

沉淀细胞数量	裂解液RL
＜5×106	450μl
5×106～1×107	600μl

2．取上述样本匀浆液450 μl，加入400 μl异丙醇和40 μl磁珠悬浮液W，振荡器混匀5min，使磁珠吸附RNA。
3．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
4．将离心管从磁力架上取下，加入900 μl去蛋白液RD（使用前检查是否加入无水乙醇），振荡混匀2 min。
5．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去，室温晾干5min。
6．（可选)将离心管从磁力架上取下，进行DNase I消化：5 μl DNase I，70 μl RDD缓冲液。将配好的工作液加入样本管中，室温放置15min，期间每5min颠倒混匀一次。
7．加入700 μl去蛋白液RD（使用前检查是否加入无水乙醇），振荡器混5min。
8．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
9．将离心管从磁力架上取下，加入700 μl漂洗液RW（使用前检查是否加入无水乙醇），振荡器混匀2 min。
10．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
11．重复步骤9和10一次。
12．短暂离心将残余溶液收集至管底，将离心管置于磁力架上，吸出所有液体弃去，室温晾干5min。
13．将离心管从磁力架上取下，加入50-100 μl RNase-Free ddH2O，60℃加热洗脱5min，期间颠倒混匀4-5次以充分洗脱RNA （或置于可加热的振荡器上洗脱)。
14．将离心管放置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心将RNA溶液转移至干净的离心管，继续后续实验或保存于-70℃~-80℃。

二、血液总RNA提取
本试剂盒仅适用于提取新鲜血液总RNA，不适用于冻存血。

1．红细胞裂解液的稀释：根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液H（例如待处理的血液样品体积为200 μl，则取140 μl 10×红细胞裂解液H），用RNase-FreeddH2O稀释至1×红细胞裂解液H。
2．向1倍体积新鲜全血中加5倍体积1×红细胞裂解液H （需自备合适的干净管子)。
  注意1：为获得zuì佳的混匀效果，血液和1×红细胞裂解液H的混合液体积不应超过管子体积的3/4。如果血液中的白细胞含量较高，可按比例减小血液的使用体积，第7步中的裂解液RL的使用体积也要进行相应调整。
  注意2：此处新鲜全血仅指哺乳动物；禽类血由于红细胞含核酸，因此不需要进行此步骤，可以根据需求确定血液起始量直接进行全血裂解（即步骤7）。
3．在冰上孵育10-15min，在孵育过程中涡旋振荡混匀2次。
  注意：在孵育的过程中溶液将变成半透明状态，表明红细胞裂解。如果必要的话，孵育时间可延长至20 min。
4．4℃条件下2,100 rpm （~400×g)离心10 min，将上清完全去除。
  注意：离心后白细胞可能会形成小球，确保完全去除上清。痕量红细胞的存在，会使白细胞小球呈现红色，而该现象会在随后的漂洗步骤中消失。
5．向白细胞沉淀中加入1×红细胞裂解液H（加入1×红细胞裂解液H的体积是第1步中全血用量的2倍），重悬细胞。
6．4℃，2,100 rpm （~400×g)离心10 min，将上清完全去除。
7．向白细胞沉淀中加入裂解液RL（使用前请加入β-巯基乙醇），具体加量按照下表进行，涡旋或使用移液器混匀。
  注：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液RL的体积，此时细胞应完全裂解，块状细胞沉淀消失。

健康人类全血	白细胞数量	裂解液RL
0.5ml	＜2×106	400μl
0.5ml～1.5ml	2×106～1×107	600μl

8．（可选)将溶液转移至过滤柱CS中（过滤柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)离心2 min，弃去过滤柱CS，收集滤液。
  注意：如果存在凝血点或片，建议进行此步骤，否则会影响后续核酸与磁珠的结合以及纯化。
9．取上述滤液加入1倍体积的异丙醇（通常为400 μl或600 μl)和40 μl磁珠悬浮液W，振荡器混匀5min，使磁珠吸附RNA。
10．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
11．将离心管从磁力架上取下，加入900 μl去蛋白液RD（使用前检查是否加入无水乙醇），振荡混匀2 min。
12．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去，室温晾干5min。
13．（可选）将离心管从磁力架上取下，进行DNase I消化：5 μl DNase I，70 μl RDD缓冲液。将配好的工作液加入样本管中，室温15min，期间每5min颠倒混匀一次。（或者使用振荡器振荡15min)。
14．加入700 μl去蛋白液RD（使用前检查是否加入无水乙醇），振荡器混匀5min。
15．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
16．将离心管从磁力架上取下，加入700 μl漂洗液RW （使用前检查是否加入无水乙醇），振荡器混匀2 min。
17．将离心管置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液体弃去。
18．重复步骤16和17一次。
19．短暂离心将残余溶液收集至管底，将离心管置于磁力架上，吸出所有液体弃去，室温晾干5min。
20．将离心管从磁力架上取下，加入50-100 μl RNase-Free ddH2O，60℃加热洗脱5min，期间颠倒混匀4～5次以充分洗脱RNA （或置于可加热的振荡器上洗脱)。
21．将离心管放置于磁力架上静置3 min，磁珠完全吸附后，小心将RNA溶液转移至干净的离心管，继续后续实验或保存于-70℃～-80℃。

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货号：BTN101118
规格：10次

名称：石蜡包埋组织RNA提取试剂盒
货号：BTN81102
规格：30次
石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的试剂

试剂盒特点：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
3. 能有效去除基因组DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀剂	30mL
RNase-free水	10mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 将5片厚度为6-8μM的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(zuì好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A，在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
3. 7000×g室温离心2分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4.小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6. 加入150μL溶液C，55℃保温过夜。
7. 短暂离心，95℃保温10分钟。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震荡半分钟。
9. 加入0.1mL自备lǜ仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
10. 13000-5000×g室温离心3～5分钟。
11. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
13. 13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
14.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
16. 13000-15000g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
18. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的电泳检测：
21. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
22. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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