BTN11-170601 禽流感病毒H5/H7/H9亚型荧

禽流感病毒H5/H7/H9亚型荧由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，我公司专注于病毒PCR检测试剂盒产品的研发、生产和供应，为您提供的禽流感病毒H5/H7/H9亚型荧质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括禽流感病毒H5/H7/H9亚型荧光RT-PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：禽流感病毒H5/H7/H9亚型荧光RT-PCR检测试剂盒
英文名称：H5/H7/H9 Subtypes of Avian Influenza Virus qRT-PCR Kit
产品货号：BTN11-170601
产品规格：50次

本产品是基于实时荧光RT-PCR法的禽流感H5、H7、H9亚型快速检测试剂盒。禽流感（Avian Influenza, AI）是由正粘病毒科中禽流感病毒（Avian Influenza Virus, AIV）引起的一种禽类的疾病综合征。AIV基因组由8个负链股RNA片段组成,其血清亚型众多，抗原变异性强，宿主范围广泛。禽流感H5、H7、H9亚型的致病性强，危害大。

产品特点：
1. 灵敏度高，可以达到50拷贝/μL，远高于常规方法。
2. 可分别对禽流感病毒H5、H7和H9亚型进行定量测定。
3. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板，操作简单，定量准确快速。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
2×RT MasterMix	BTN170403	0.5mL
2×qPCR Mix	BTN90408	1.1mL×2
H5专一性引物对	yw13211322	100 μL
H5 阳性对照，XXX 10E9拷贝/μL	yw13231324	50 μL
H7专一性引物对	yw13251326	100 μL
H7阳性对照，XXX 10E9拷贝/μL	yw13271328	50 μL
H9专一性引物对	yw13291330	100 μL
H9阳性对照，XXX 10E9拷贝/μL	yw13311332	50 μL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对人副流感病毒1 型特异性引物，一对人副流感病毒3 型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒1 型/3 型RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒1 型的探针报告基团为FAM，人副流感病毒3 型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中人副流感病毒1型/3型的特异性检测。适用于人副流感病毒1型/3型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
人副流感1型/3型反应液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感1型/3型阳性对照(PIV1/PIV3-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PIV1/PIV3-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测PIV1，VIC/HEX/JOE基团检测PIV3。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(PIV1/PIV3-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35 PIV1核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PIV1核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PIV1核酸阳性；否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 PIV3核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PIV3核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PIV3核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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