SY0007 核糖核酸酶A(来源于牛胰腺)

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特别提示：包括核糖核酸酶A(来源于牛胰腺)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：核糖核酸酶A(来源于牛胰腺)
英文名称：Ribonuclease A (RNase A) from bovine pancreas
产品货号：SY0007
产品规格：100mg|1g

核糖核酸酶A（Ribonuclease A，常用缩写RNase A），一种含4个二硫键的单链多肽，分子量约为13.7kDa（氨基酸序列）。作为一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease），特异性降解单链RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）残基。具体来说，切割识别的是由某核苷酸上的5’-核糖和相邻的嘧啶类核苷酸3’-核糖上磷酸基团形成的磷酸二酯键，从而使得2’, 3’-环磷酸水解为对应的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG经RNase A切割产生pG-pG-pCp 和A-PG）。RNase A切割单链RNA活性zuì高，推荐工作浓度为1-100μg/ml，兼容于各种反应体系。低盐浓度（0-100mM NaCl），可用来切割单链RNA，双链RNA，以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。然而，高盐浓度（≥0.3M），RNase A仅特异性切割单链RNA。

核糖核酸酶A（RNase A）zuì常见的应用在于质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA，此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一，可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。另外，本品还可用于RNA酶保护分析、RNA序列分析等分子生物学实验。

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名称：白细胞裂解液
货号：BTN130989
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的氯fǎng，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。

名称：柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法)
货号：BTN100303
规格：50次
真菌DNA提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒的姊妹产品，它利用玻璃珠法破碎细胞，主要用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒采用液氮研磨法破碎细胞，适用于从真菌菌丝体中提取其基因组DNA)。

产品特点：
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟，方便、快速和。
4.一次可以处理5mL的过夜真菌培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。

试剂盒组成：

成成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 对菌液：取3-5mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约50mg)，转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到离心管中，然后进入下一步操作。
4.在材料中加入无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5.沉淀中加入500μl溶液A和0.5克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟。
6. 加入500μL的溶液B，涡旋震荡3分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL，分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
8.在离心吸附柱中加入500μl通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10. 12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100μl DNA洗脱液2.0，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为真菌DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。

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