QN2715 免疫组化SP法检测试剂盒

免疫组化SP法检测试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，我公司的免疫组化SP法检测试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)
英文名称：SP Kit(Rabbit)
产品货号：QN2715
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml

本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

试剂盒组成：

组分	3ml	6ml	18ml
封闭液（5%BSA）	3ml	6ml	18ml
3% H2O2	3ml	6ml	18ml
生物素-羊抗兔IgG浓缩液	30μl	60μl	180μl
链酶亲和素-POD浓缩液	30μl	60μl	180μl
稀释液	10ml	20ml	60ml
20×DAB显色液A	0.3ml	0.6ml	1.8ml
20×DAB显色液B	0.3ml	0.6ml	1.8ml

保存：如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。

操作步骤（以石蜡切片为例）：
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：
  a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
  b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
  c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A，加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

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货号	名称	规格
YT075	DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒	共20ml|共100ml
YT085	漂片抗原修复液(10X)	100ml
YT088	免疫染色一抗稀释液	100ml
YT089	免疫染色洗涤液	250ml
ZN1870	EDTA脱钙液	500ml
ZN1872	Bradford蛋白浓度测定试剂盒	1盒
ZN1906	BSA PBS缓冲系统封闭液(干粉)	1包

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名称：蛋白A和G琼脂糖
货号：YT883
规格：2ml
本品主要用于免疫沉淀或免疫共沉淀，也可以用于抗体的纯化。

Protein A+G Agarose适合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein A+G Agarose单独可以免疫沉淀的抗体，包括mouse IgG1，IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit IgG, rabbit and goat polyclonal Abs，以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4。

Protein A和Protein G都共价交联到4% agarose beads上，2ml Protein A+G Agarose中共含有约2mg重组的Protein A+G。2 ml Protein A+G Agarose共可以结合约14mg human IgG。

Protein A+G Agarose配制在TBS溶液中，2ml中共含有0.5ml Agarose beads。

本Protein A+G Agarose如果用于常规的免疫沉淀，可以免疫沉淀100次。

注意事项：
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. Protein A+G Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
3. 从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：抗c-Myc标签抗体琼脂糖介质
货号：WE0329
规格：100μl
抗Myc标签免疫亲和介质是将抗Myc标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上，此种琼脂糖能够用于免疫沉淀或者免疫共沉淀，检测含有Myc标签的蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成第410-419位多肽序列(EQKLISEEDL)
应用范围：IP

名称：EDTA脱钙液
货号：ZN1870
规格：500ml
保存条件：4℃保存 ,一年有效，避免阳光直射。
产品简介：
在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。骨组织含钙量zuì多。除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
乙二胺四乙酸(EDTA)与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
主要用途：
用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明：
1．将骨组织截成0.5cm×0.3cm×0.2cm大小骨片，生理盐水清洗后立即投入冷冻的固定液中，4℃固定 12 h~24 h；固定结束后骨片在0.2mol磷酸缓冲液中充分漂洗。
2．漂洗后投入脱钙液中，室温下脱钙，每日检查脱钙情况，直至骨片脱钙完全为止。脱钙结束后，骨片用蒸馏水冲洗20min，脱钙液每隔4-5天更换一次新液，经过 3次更换新液后，此后每天更换新液，但请根据具体实验具体分析。以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3．然后进入常规脱水处理程序并包埋、切片。
注意事项：
1.为使脱钙更为充分，每次zuì好更换新液，这既弃去了脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙温度的作用。
2.脱钙时间以脱钙完成为标准：以大头针能轻易刺进骨密质为准。
3.脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。低温(4℃)则会减慢脱钙速度，使组织在脱钙液中浸泡过久而引起损伤。
4.为了提高 EDTA的脱钙速度，骨组织取材尽量取薄。
5.为了提高 EDTA的脱钙速度，也可以采用微波脱钙。用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间，以微波间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温，冷却 5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高(70℃)。脱钙时脱钙液温度过高，易导致假阴性，背景色深等缺点。因此，在时间要求不紧迫的前提下，该方法也不应是选。
6.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的组织充分固定之后再进行脱钙。然后再行常规制片。

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