WH0057 DNA/RNA共提取试剂盒

北京百奥莱博供应的DNA/RNA共提取试剂盒仅用于生物化学研究方面，我公司专注于DNA提取纯化产品的研发、生产和供应，为您提供的DNA/RNA共提取试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括DNA/RNA共提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA/RNA共提取试剂盒
英文名称：DNA/RNA Isolation Kit
产品货号：WH0057
产品规格：50次

本试剂盒可从培养的动物细胞或者组织中快速同步提取DNA和总RNA，可同时处理大量不同样品。40-50min内即可完成反应，提取的DNA和总RNA纯度较高，可用于PCR和RT-PCR等多种分子生物学下游实验。

产品应用：
·方便：从同一样本中同时得到DNA和RNA。
·快速：40-50min即可完成一次抽提。
·安全：提取过程无需酚lǜ仿有机物。

试剂盒组成：

组分	50T
裂解液RLplus	30ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
缓冲液GD	13ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
吸附柱CB3	50个
RNase-Free离心管（1.5ml)	100个
RNase-Free离心管（2ml)	50个
RNase-Free收集管（2ml)	50个

储存条件：室温（15-25℃)保存一年。加入β-巯基乙醇的裂解液RLplus 4℃可放置一个月。

选配试剂：DNaseI （目录号：WH0051)

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）

使用前注意事项：
1．操作前在RLplus中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1ml RLplus中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液zuì好现用现配。配好的RLplus 4℃可放置一个月，裂解液RLplus在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热至56℃溶解并平衡至室温后使用。
2．次使用前应在漂洗液RW、PW和缓冲液GD中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
3．以下操作如非指明，均在室温下进行。
4．对于某些敏感的RNA应用实验可能需要完全去除DNA，可以参照DNase I消化流程在柱上进行。

操作步骤：

一、从培养细胞中同时提取DNA和总RNA
1．收集细胞：
悬浮细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×10⁷）：估计细胞数量，300×g离心5 min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。
单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×10⁷）：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过10cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法。）
1）直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸除细胞培养基上清，立即进行第2步裂解步骤。
2）胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
  注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，造成RNA的产量降低。
2．裂解处理
对于离心得到的细胞沉淀：轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，加入适量裂解液RLplus（见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋震荡30 sec。

沉淀细胞数量	裂解液RLplus
＜5×106	350μl
5×106-1×107	600μl

对于直接裂解的细胞：RLplus （见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），将细胞裂解液转移至离心管中，涡旋震荡30 sec。

容器直径	裂解液RLplus
＜6cm	350μl
6～10cm	600μl

3．将所有溶液转移至DNA吸附柱CB3 （吸附柱CB3放在2 ml RNase-Free离心管中)，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，收集滤液。将吸附柱CB3放在收集管中室温或4℃放置至后续提取DNA。

总RNA提取：
4．向滤液中加入1倍体积70%乙醇（通常为350 μl或600 μl)，混匀（此时可能会出现沉淀)，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中（吸附柱CR3放入收集管中)，12000rpm（~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
  注意：配制70%乙醇时请使用RNase-Free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。将溶液和沉淀转移至吸附柱CR3时，如果体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。
5．向吸附柱CR3中加入700 μl去蛋白液RW1，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
6．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
7．重复步骤6。
8．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。
9．将吸附柱CR3转入一个新的1.5 ml RNase-Free离心管中，加入100 μl RNase-Free ddH2O室温放置2 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，得到RNA溶液。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。

基因组DNA提取：
10．向DNA吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入乙醇)，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
11．向吸附柱CB3中加入500 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
12．重复步骤11。
13．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CB3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。
14．将吸附柱CB3转入一个新的1.5ml RNase-Free离心管中，加入100 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，得到DNA溶液。

二、从动物组织中同步提取DNA和总RNA
1．匀浆处理：
切割小块组织加入适量裂解液RLplus（见下表，使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），用电动或玻璃匀浆器将组织彻底研磨。涡旋震荡30 sec。

起始组织量	裂解液RLplus
10-20mg	350μl
≥20mg	600μl

2．12000rpm（~13400×g)离心3-5 min，小心吸取上清至DNA吸附柱CB3 （吸附柱CB3放在2 ml离心管中)，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，收集滤液。将吸附柱CB3放在收集管中室温或4℃放置至后续提取DNA。

总RNA提取：
3．向滤液中加入1倍体积70%乙醇（通常为350 μl或600 μl），混匀（此时可能会出现沉淀）。
  注意：配制70%乙醇时请使用RNase-Free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。
4．得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中（吸附柱CR3放入收集管中），12,000rpm（~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
  注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱CR3时，如果体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。
5．向吸附柱CR3中加入700 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
6．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
7．重复步骤6。
8．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。
9．将吸附柱CR3转入一个新的1.5 ml RNase-Free离心管中，加入30-100 μl RNase-Free ddH2O室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min，得到RNA溶液。
  注意：洗脱体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。

基因组DNA提取：
10．向DNA吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入乙醇)，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
11．向吸附柱CB3中加入500 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
12．重复步骤11。
13．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CB3在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。
14．将吸附柱CB3转入一个新的1.5 ml RNase-Free离心管中，加入30-100 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，得到DNA溶液。

DNase I消化流程（可选）：
DNase I储存液的配制：将DNase I干粉（1500U)溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
  注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃ （可保存6周)，不要再次冻存。
1．按照RNA提取流程1-4步进行提取。
2．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
3．DNase I工作液的配制：取10μl DNase I储存液放入新的1.5 ml RNase-Free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
4．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
5．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
6．按照RNA提取流程6-9步进行提取。

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名称：白细胞裂解液
货号：BTN130989
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的lǜ仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。

名称：柱式冻存血液DNA提取试剂盒
货号：BTN120720
规格：50次
血液DNA是重要的研究材料，但是血液DNA在常温下存放的时间很短，因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜，释放出DNA，因此从冻存血液中提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。

产品特点：
1.适用于各种动物血液，包括禽类和昆虫。
2. 微量提取，每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。
5. 操作简单，整个过程约20分钟，室温操作，适合大规模样品处理。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	20ml
溶液C	100ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1.从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品，室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中，加入400μL溶液A，充分震荡混匀。如果是禽类血液，则少加10倍，只加40μL。
3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL lǜ仿(自备)，振荡1分钟。由于离心管比较满，所以需要确保管底溶液转动起来，否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g离心10分钟，小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管
中。注意：zuì好不要室温离心，如果室温离心，则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚，只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管，否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL)，立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次0.7mL左右，转移后静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合，然后室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液，然后再加入0.7mL，重复上述操作，直到全部混合液挂柱。
8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
10.室温12000 g离心30秒，去尽残留液体(此步骤十分重要，不要省略，否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中，加入50μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果更佳。
12.室温12000 g离心30秒，离心管底部溶液即DNA溶液，可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强，如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱，还能洗脱下一些血液DNA。

疑难解答：
Q：保存血液样品时温度越低越好吗？
A：不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃，-20℃，4℃保存了6个月的蛙血，发现保存温度越低，血液DNA的断裂越严重。
Q：本产品是否可以用于放量操作？
A：可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理5-100mL 血液，只是客户需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q：冷冻血液为何DNA产量很低？
A：冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失，所以zuì后得到的DNA是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。

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