WH0005 微量样品基因组DNA提取试剂盒(

产品简介
微量样品基因组DNA提取试剂盒(是高品质的DNA提取纯化产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于生化实验研究等领域,本品质量稳定,价位合理,需要微量样品基因组DNA提取试剂盒(等DNA提取纯化产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括微量样品基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:微量样品基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:Extraction kit for genomic DNA from minute sample
产品货号:WH0005
产品规格:50次
本试剂盒用于从小剂量的血液、干血点、血清/血浆、微量组织、漱口水、毛发、微切割组织等微量样品中提取基因组DNA,所得基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,样品裂解后,DNA在高盐条件下与硅胶膜结合,在低盐、高pH值时DNA从硅胶膜上洗脱下来。
试剂盒组成:
| 组分 | 50T |
| 缓冲液GA | 15ml |
| 缓冲液GB | 15ml |
| 缓冲液GD | 13ml |
| 漂洗液PW | 15ml |
| 洗脱缓冲液TB | 15ml |
| Proteinase K | 1 ml |
| Carrier RNA | 310μg |
| RNase-Free ddH2O | 1 ml |
| RNase-Free吸附柱CR2 | 50个 |
| 收集管(2 ml) | 50个 |
保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。Carrier RNA配置成储液后置于-20℃。
Carrier RNA的作用:
试剂盒中提供了一种特殊Carrier RNA,当需要从非常少量的样品中提取基因组DNA时,推荐在操作步骤中加入Carrier RNA,这样有助于提高DNA与吸附柱的结合。
Carrier RNA储存液的配制:
在次使用Carrier RNA时,请将Carrier RNA(310μg)溶解在310μl RNase-Free ddH2O中,将溶液分装储存于-20℃,此时该溶液的浓度为1 μg/μl;该储存液应避免反复冻融,冻融次数不能超过3次。
自备试剂:提取毛囊样本需备DTT、无水乙醇、RNaseA(可选)
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.样品使用量的确定:
吸附柱zuì大容量:700 μl
zuì小洗脱体积:20 μl
抗凝全血(哺乳动物):zuì大量100 μl
样品使用zuì大量(动物组织):zuì大量10mg
2.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解。
3.所有的样品使用前请平衡到室温(15-25℃)。
4.次使用试剂盒时,请按照试剂瓶上的提示在缓冲液GD和漂洗液PW中添加无水乙醇。
5.为了确保从微量样本中得到更多的DNA,试剂盒配备了Carrier RNA。由于Carrier RNA本身是小核酸,所以得到的基因组测定OD260值会比真实值偏大,建议将得到的基因组直接用PCR进行检测。
使用方法:
一、从少量血中提取基因组DNA
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.取1-100 μl血液到1.5 ml的离心管中。
2.不足100 μl的血液样本加缓冲液GA补足到到100 μl。
3.加入10 μl的Proteinase K溶液。
注意:如果需要去除RNA,可加入5 μl RNase A (100mg/ml)溶液(目录号:WH0217),振荡15 sec,室温放置5 min。
4.加入100 μl的缓冲液GB(如果zuì初所取血液样品体积为1-10 μl,请加入1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl),轻轻颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的液滴。56℃温浴10min,并不时轻摇样品。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般56℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5.加入50 μl乙醇(96-),如果室温超过25℃,请将乙醇置冰上预冷。轻轻颠倒混匀样品,室温放置3 min。简短离心以去除管盖内壁的液滴。
6.将上一步所得溶液都加到一个吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
二、从干血点中提取基因组DNA
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.取三片3×3mm的样品到1.5 ml的离心管中。
2.加入180 μl的缓冲液GA。
3.加入20 μl Proteinase K溶液,轻轻颠倒混匀。56℃孵育1h,期间每10min涡旋10 sec。
4.加入200 μl的缓冲液GB和1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl,轻轻颠倒混匀,70℃孵育10min,期间每3 min涡旋10 sec。孵育结束后简短离心以去除管盖内壁的液滴。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5.加入200 μl的乙醇(96-)。如果室温超过25℃,请将乙醇置冰上预冷。轻轻颠倒混匀样品,室温放置5 min,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
6.将上一步所得溶液都加到一个吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
三、从血清/血浆中提取循环核酸/游离核酸
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.取100 μl -200 μl血清/血浆到2ml的离心管中,如不足100 μl,加缓冲液GA到100 μl终体积。
2.加入20 μl Proteinase K溶液,涡旋混匀。
3.加入200 μl的缓冲液GB (如血清/血浆体积<50 μl,可加入1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl),轻轻颠倒混匀,56℃孵育10min,并不时摇动样品。简短离心以去除管盖内壁的液滴。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般56℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4.加入200 μl的乙醇(96-)。如果室温超过25℃,请将乙醇置冰上预冷。轻轻颠倒混匀样品,室温放置5 min,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
5.将上一步所得溶液添加到一个吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
6.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.重复操作步骤7。
9.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
四、从漱口水中提取基因组DNA
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.在50 ml无菌管中添加10-20 ml漱口水样品,800rpm (~1,800×g)离心5 min,将上清小心倒掉。
2.向沉淀中添加200 μl缓冲液GA重悬,将全部悬液转移至1.5 ml离心管中。
3.加入20 μl Proteinase K溶液,涡旋10 sec混匀,56℃放置60 min,期间每15 min涡旋混匀数次。
4.加入200 μl缓冲液GB和1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl,充分颠倒混匀,70℃放置10min,期间每3 min涡旋10 sec。此时溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5.加200 μl无水乙醇,充分颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
注意:加入无水乙醇后可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀加入一个吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
五、从毛囊中提取基因组DNA
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
请提前准备1M DTT溶液。
1.材料处理:含毛囊的毛发:在1.5 ml离心管中加入250 μl缓冲液GA,20 μl蛋白酶K,20 μl 1M DTT,混匀。从毛发根部毛囊处取1cm长的一段,与上述溶液涡旋混匀10 sec。
2.在56℃孵育直到样本充分降解消化。需要时间至少60 min,期间每隔20 min涡旋10 sec混匀;或者置于水浴振荡仪中消化。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
注意:裂解时间根据样本不同有所差异,一般毛发需要1h;过夜消化也可,且过夜消化对整个实验没有太大影响。羽茎样本不会完全消化,对于未消化完全的羽茎样本,可以直接离心,取上清液进行后续实验。
3.添加300 μl缓冲液GB和1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl(Carrier RNA储存液配置见第2页),充分混匀。
4.56℃水浴10min,期间每3min涡旋混匀10 sec。
5.添加300 μl无水乙醇,充分涡旋混匀。简短离心以去除管盖内壁的液滴。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀分两次加入一个吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
六、从微量组织中提取基因组DNA
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.取不超过10mg的组织到1.5 ml的离心管中,立即加入180 μl缓冲液GA,室温放置,使离心管温度平衡到室温。
2.加入20 μl Proteinase K溶液,涡旋混匀10 sec。
3.在56℃孵育直到样本充分降解消化,需要时间大约30 min到1h,期间每15 min需要涡旋混匀;或者置于水浴振荡仪中消化。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
4.加入200 μl的缓冲液GB和1 μl Carrier RNA储存液,浓度为1 μg/μl,充分颠倒混匀,70℃放置10min,期间每3 min涡旋混匀10 sec,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
5.加入200 μl的乙醇(96-)。如果室温超过25℃,请将乙醇置冰上预冷。轻轻颠倒混匀样品,室温放置5 min,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
6.取上一步所得溶液全部转入吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
7.向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
8.向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm(~13400×g)离心30 sec,弃废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
9.重复操作步骤8。
10.12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2-5 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于20 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
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名称:柱式骨骼DNA提取试剂盒
货号:BTN91102
规格:50次
本试剂盒专门用于从动物骨骼(包括骨粉)样品中提取DNA的产品,20次规格足够50次微量提取。
产品特点:
1. 微量提取,一次可以处理300mg左右的骨骼(但需要先将骨粉变成骨粉)。
2. 柱式操作,方法简单,整个过程只需要40-60分钟。
3. 得到的DNA分子量不均匀,一般在20 Kb到100bp之间,具体取决于骨骼的新鲜程度,骨粉的加工方法等。
4. 得到的DNA可以直接用于PCR或荧光PCR反应。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50mL |
| 溶液B | 15mL |
| 溶液C | 30mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液2.0 | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 骨粉的制备:用自备酒精将骨骼表面擦洗干净,以防污染物对后续PCR的影响,然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。对于已经制备好的、商品化的骨粉,可以跳过此步,直接进入下一步。
2. 用天平称取0.2克骨粉,转移到2mL塑料离心管中。
3. 加入1mL溶液A到骨粉中,充分振荡30秒混匀。(注意:溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用,且骨粉加到溶液A中后会特别黏稠,需使劲振荡混匀。)
4. 65℃水浴放置30分钟。
5. 加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备lǜ仿,充分振荡30秒混匀。
6. 12000rpm室温离心3分钟,小心将上清液转移到一个新的塑料离心管中。
7. 加入0.5mL溶液C,颠倒混匀。
8. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要 12000rpm室温离心1分钟,并弃收集管中的穿透液。
9. 加入0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
10. 再加入0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
11. 12000rpm室温离心半分钟,弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要,否则残留的液体会抑制后续的PCR。
12. 将离心吸附柱套入到一个自备的干净的1.5mL塑料离心管中,在离心吸附柱的滤膜的中部加入30μL DNA洗脱液,然后室温放置2分钟。如果先将DNA洗脱液预热到60-80℃再使用,效果更佳。
13. 12000~15000g室温离心1分钟,离心管中收集的样品即为骨骼DNA。
14. 取少量进行电泳检测。注意:一般DNA都呈现弥散状,分布在20 Kb到100bp这一广泛的范围,其比例跟骨骼(或骨粉)的新鲜程度、加工过程(对骨粉)等因素密切相关。
15. DNA样品可以直接用于PCR,也可放-20℃长期保存。

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